[发明专利]血浆中尼古丁和可替宁的前处理方法、前处理试剂盒及检测方法

权利要求书

1.血浆中尼古丁和可替宁的前处理方法，其特征在于，包含依次的下述步骤：

步骤A：将血浆与内标工作液混合，加入磷酸水溶液混匀成第一混合液；

步骤B：将所述第一混合液加入活化的混合型阳离子交换柱，通过正压或负压使得所述第一混合液通过所述混合型阳离子交换柱；

步骤C：依次加入甲酸水溶液和乙腈到所述混合型阳离子交换柱中，于正压或负压条件下将所述混合型阳离子交换柱的柱床中的溶剂除尽；

步骤D：使用氨水与乙腈混合得到的第二混合液对所述混合型阳离子交换柱进行洗脱得到洗脱液；

步骤E：将所述洗脱液进行吹干复溶。

2.根据权利要求1所述的血浆中尼古丁和可替宁的前处理方法，其特征在于，所述步骤A中，所述血浆与所述磷酸水溶液的体积比为1:0.8~1.2，所述磷酸水溶液包含体积分数为1~5%的磷酸。

3.根据权利要求1所述的血浆中尼古丁和可替宁的前处理方法，其特征在于，所述步骤B中，将所述第一混合液加入活化的混合型阳离子交换柱，通过正压或负压使得所述第一混合液以1~5s/d的流速通过所述混合型阳离子交换柱。

4.根据权利要求1所述的血浆中尼古丁和可替宁的前处理方法，其特征在于，所述步骤C中，所述甲酸水溶液含有体积分数为1~5%的甲酸。

5.根据权利要求1所述的血浆中尼古丁和可替宁的前处理方法，其特征在于，所述步骤D中，所述氨水与乙腈的体积比为0.8~1.2:9，所述氨水包含质量分数大于等于15%的氨。

6.根据权利要求1所述的血浆中尼古丁和可替宁的前处理方法，其特征在于，所述步骤E中，包含于15~30℃氮气条件下对所述洗脱液进行吹干，然后复溶。

7.一种血浆中尼古丁和可替宁的前处理试剂盒，其特征在于，包含磷酸或磷酸水溶液、甲酸或甲酸水溶液、质量分数≥15%的氨水、乙腈及混合型阳离子交换柱。

8.一种血浆中尼古丁和可替宁的检测方法，其特征在于，所述血浆经过前处理，所述前处理选用权利要求1~6任一所述的血浆中尼古丁和可替宁的前处理方法或通过权利要求7所述的血浆中尼古丁和可替宁的前处理试剂盒进行前处理。

9.根据权利要求8所述的血浆中尼古丁和可替宁的检测方法，其特征在于，所述血浆经过前处理后，通过LC-MS/MS系统进行检测。

10.根据权利要求9所述的血浆中尼古丁和可替宁的检测方法，其特征在于，所述LC-MS/MS系统的检测条件为：

色谱条件：选用色谱柱规格为HILIC，100*2.1mm，2.7μm；柱温40℃；流动相A：含5mM甲酸铵、体积分数为0.1%甲酸的水；流动相B：体积分数为0.1%的甲酸甲醇溶液；进样量：5μL；梯度洗脱；所述梯度洗脱的条件为：

0min，流动相A与流动相B的体积比为9:1，流速为0.3mL/min；

1.5min，流动相A与流动相B的体积比为9:1，流速为0.3mL/min；

3min，流动相A与流动相B的体积比为1:9，流速为0.3mL/min；

4.5min，流动相A与流动相B的体积比为1:9，流速为0.3mL/min；

4.6min，流动相A与流动相B的体积比为9:1，流速为0.3mL/min；

6min，流动相A与流动相B的体积比为9:1，流速为0.3mL/min；

质谱条件：电喷雾电压3300V；鞘气压力：30 arb；辅助气压力：5arb；离子传输管温度：365 ℃；辅助气温度：290 ℃；采集方式：多反应监测；尼古丁、可替宁、尼古丁-D4、可替宁-D3定量离子对M/Z分别为163.1/130.1、177.2/80.1、167.2/134.1、180.2/80.1，定性离子对M/Z分别为163.1/117.1、177.2/98.1、167.2/121.1、180.2/101.1。