[发明专利]一种定量测定组培苗不同氮源的自养和异养效率的方法

权利要求书

1.一种定量测定组培苗不同氮源的自养和异养效率的方法，其特征在于：包含以下步骤：

第一，将所有培养选定在同一培养室中培养，所使用的蔗糖选定为同一生产厂家、同一批次的稳定碳同位素组成相同的甘蔗蔗糖；

第二，将在甘蔗蔗糖培养基上培养的待测组培苗通过调节培养基的激素比例使其处于增殖阶段，形成无根的组培苗；同时测定组培培养基中甘蔗蔗糖的δ¹³C值δ_CS以及待测植物在该组培室中仅利用二氧化碳生长的叶片的δ¹³C值δ_C；

第三，通过测定用于配置植物组织培养的培养基中的硝酸盐的稳定氮同位素比值，筛选出稳定氮同位素值差值大于10‰的两种硝酸盐，其稳定氮同位素值分别为δ¹⁵N₀₁和δ¹⁵N₀₂；分别将这两种硝酸盐作为唯一氮源配置为待考察的硝酸盐浓度的培养基；

第四，取带有1个单芽的待测组培苗分别培养在上述稳定氮同位素值不同的两种硝酸盐作为唯一氮源的培养基中；

第五，组培苗经过5周培养后，分别测定上述两种硝酸盐作为唯一氮源的培养基培养下的组培苗叶片的稳定氮同位素值，其叶片稳定氮同位素值分别记为δ¹⁵N_N1和δ¹⁵N_N2；

第六，通过测定用于配置植物组织培养的培养基中的铵盐的稳定氮同位素比值δ¹⁵N_A，选出其稳定氮同位素比值δ¹⁵N_A与δ¹⁵N₀₁和δ¹⁵N₀₂均大于10‰的铵盐；

第七，将稳定氮同位素值为δ¹⁵N₀₁和δ¹⁵N₀₂的硝酸盐分别与上述铵盐配置成两组混合氮源培养基；

第八，同样，将带有1个单芽的待测组培苗，分别同时培养在上述两组混合氮源培养基上；

第九，同样，待组培苗培养5周后，测定在上述两组混合氮源培养基上培养的组培苗下叶片稳定氮同位素值，铵盐与稳定氮同位素值为δ¹⁵N₀₁的硝酸盐组成的混合氮源培养基培养的组培苗叶片稳定氮同位素值记为δ¹⁵N_N1mix，铵盐与稳定氮同位素值为δ¹⁵N₀₂的硝酸盐组成的混合氮源培养基培养下的组培苗叶片稳定氮同位素值记为δ¹⁵N_N2mix；

第十，同时测定在上述两组混合氮源培养基上培养的组培苗叶片稳定碳同位素值δ_CT以及碳氮含量，叶片C/N比值记为R；

第十一，利用δ¹⁵N_N1、δ¹⁵N_N2以及δ¹⁵N_N1mix和δ¹⁵N_N2mix，计算组培苗利用硝酸盐份额f_N；进而计算出铵盐利用份额f_A；

第十二，利用δ_CS、δ_CT以及δ_C；计算组培苗自养份额f_AT；进而计算出异养份额f_HT；计算组培苗自养份额f_AT的方法为：将δ_CS、δ_CT以及δ_C带入方程：异养份额f_HT的公式是：f_HT＝1-f_AT；

第十三，依据叶片的R、f_A、f_N、f_AT以及f_HT，进而获得组培苗不同氮源的自养和异养效率；获得组培苗不同氮源的自养和异养效率的方法为：铵态氮的自养效率E_AT-A，E_AT-A＝Rf_AT/f_A；铵态氮的异养效率E_HT-A，E_HT-A＝Rf_HT/f_A；硝态氮的自养效率E_AT-N，E_AT-N＝Rf_AT/f_N；硝态氮的异养效率E_HT-N，E_HT-N＝Rf_HT/f_N。