[发明专利]一种细胞液葡萄糖含量检测方法

说明书

本发明公开了一种细胞液葡萄糖含量检测方法，包括以下步骤：a、在稀释板中加缓冲剂，细胞液样品，标准品；b、配制葡萄糖检测反应液；c、在检测板中的加入葡萄糖检测反应液；d、酶标仪检测细胞液样品糖浓度，计算细胞液样品葡萄糖含量；其中，混合机包括主体、电机、旋转框、支架、加料装置、旋转辊、旋转盘、混合装置；这样的方法在细胞培养过程中用少量细胞液样品即可完成葡萄糖含量检测，无需进行离心等前处理工作，简化检测步骤；测定用酶标仪即可完成，操作简便；同时在配置葡萄糖检测反应液的时候采用混合装置能提高混合效率；采用加料装置能实现定量加料，提高了配置效果。

技术领域

本发明属于细胞液葡萄糖含量检测技术领域，尤其是涉及一种细胞液葡萄糖含量检测方法。

背景技术

葡萄糖(Glucose)，有机化合物，分子式C6H12O6，是自然界分布最广且最为重要的一种单糖。葡萄糖在生物学领域具有重要地位，是活细胞的能量来源和新陈代谢中间产物，也是细胞的主要供能物质。在细胞培养，尤其是批次补料实验过程中，葡萄糖的监测及及时补充是维持细胞存活的基础。

目前实验室细胞液葡萄糖含量主要由紫外分光光度计法或全自动生化分析仪检测，检测原理主要基于葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法、葡萄糖氧电极法等。仪器检测虽然自动化程度高，较为方便快捷，但受限于仪器通量，难以同时完成大批量细胞液样品检测。此外，利用生化分析仪检测Glucose受仪器限制，需要配套的试剂、标定物及质控物，单位细胞液样品成本较高。紫外法虽然成本相对较低，但需要细胞液样品量相对较多，不利于小体积细胞培养使用。

这些现有技术的缺点在于：检测成本较高，细胞液样品量大，不能同时完成大批量细胞液样品检测，使用受仪器、耗材、资源等限制；市场需要一种在细胞培养过程中用少量细胞液样品即可快捷、准确、大量地完成葡萄糖含量检测的反应液和检测方法，本发明解决这样的问题。

发明内容

本发明为了克服现有技术的不足，提供一种细胞液葡萄糖含量检测方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：包括以下步骤：

a、在稀释板中加200ul缓冲剂和20ul细胞液样品，标准品；

b、分别将显色剂、GOD、HRP和缓冲剂注入混合机内，按6:3:1:1的比例将显色剂、GOD、HRP和缓冲剂依次滴入混合试管内，配制葡萄糖检测反应液；

c、在检测板中的每个孔中加入100ul葡萄糖检测反应液，再在含有葡萄糖检测反应液的孔中加入20ul细胞液样品，标准品；

d、将含有细胞液样品，标准品的反应液避光放置45分钟，在酶标仪上用405nm的吸光波长检测细胞液样品糖浓度，作出标准曲线，计算细胞液样品葡萄糖含量；；

其中，所述b步骤中所述混合机包括主体、设于所述主体底部的电机、设于所述主体内的旋转框、设于所述主体上的多个支架、设于所述支架上的加料装置、设于所述电机上的旋转辊、设于所述旋转框上的旋转盘、设于所述旋转盘内的混合装置；所述混合装置包括设于所述旋转盘上的多个试管孔、设于所述试管孔内的旋转环、设于所述旋转环上的夹持机构、设于所述旋转辊上的偏心轮、设于所述偏心轮上的定位块、设于所述旋转盘底部的定位孔、设于所述定位块上的定位弹簧、设于所述偏心轮内的对接齿轮、设于所述偏心轮上的旋转块、设于所述旋转块上的对接齿环、设于所述旋转块上的多块移动块、设于所述移动块上的移动弹簧、设于所述移动块上的对接齿、设于所述旋转环上的第一齿轮、设于所述主体内壁上的相嵌环、设于所述旋转盘侧壁上的复位杆、设于所述复位杆上的复位弹簧；将混合用的试管放入试管孔内，在夹持机构的作用下使试管稳固在试管孔内；启动电机驱动旋转辊开始旋转，当试管孔旋转到加料装置的正下方的时候，自动将混合的材料滴入试管内；与此同时，旋转辊带动偏心轮旋转；进一步的定位块插进定位孔内，从而能带动旋转盘开始偏心旋转；同时在对接齿轮的作用下，旋转块开始旋转，然后对接齿带动多个第一齿轮开始旋转，从而带动旋转环开始旋转；此时试管内的混合材料得到充分的搅拌混合，形成混合液。.