[发明专利]一种脐带血来源的靶向CD19的CAR-NK细胞及其制备方法

说明书

本发明提供了一种CAR‑NK细胞，所述CAR‑NK细胞能够地提高肿瘤细胞的杀伤效率和临床治疗的安全性、有效性；同时，本发明还提供了所述一种CAR‑NK在制备药物中的应用，从而提供了一种具有应用前景的安全、可靠、高效肿瘤治疗的新手段。

技术领域

本发明属于免疫治疗领域，涉及一种脐带血来源的靶向CD19的CAR-NK细胞及其制备方法。

背景技术

利用免疫学治疗手段来攻克肿瘤，一直是免疫学在转化医学方面应用的重要方向。随着各种组学(基因组学，蛋白组学等)的发展，肿瘤细胞由于突变产生的免疫原性得到了广泛的认可，这为肿瘤免疫治疗奠定了理论的基础。同时，随着肿瘤免疫学研究自身的积累，肿瘤免疫治疗近期取得了巨大的进步，一系列新的免疫治疗手段逐步进入临床。

CD19为I型单次跨膜糖蛋白，在B细胞发育早期表达，并在成熟B细胞阶段持续表达，是B细胞最可靠的表面生物标志物之一。同时CD19与补体受体CD2 1，四跨膜蛋白CD81一起，是成熟B细胞表面上多分子复合物的主要信号传导成分，在维持体液，抗原诱导的反应和耐受诱导之间的平衡中起着关键作用。大量的研究证明，CD19可作为治疗B细胞相关疾病的靶点用于CAR细胞的构建。

CD19已成为CAR-T细胞疗法领域成功且热门的一大靶点。目前经过大量的临床实践证明，以该CD19为靶点开发的CAR-T药物取得了显着的疗效。诺华制药公司2017年3月29日宣布其CAR-T产品CTL019进入FDA加速审批通道。2 015年12月，FDA授予了Kite Pharma的CAR-T疗法KTE-C19的突破性疗法认证(BTD)，用于治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的适应症疗法。2017年 4月1日，Kite Pharma也宣布正式向FDA完成提交CAR-T疗法KTE-C19(后改名为“axicabtagene ciloleucel”)的生物制品许可申请(BLA)滚动申报。

自然杀伤(natural killer，缩写NK)细胞是非特异性免疫系统的重要组成部分，先天免疫系统反应的关键性介质细胞。NK细胞是一种广谱免疫细胞，具有快速发现和摧毁异常细胞(如癌症或病毒感染的细胞)的功能，而且不需要提前致敏或H LA配型，即可展示强大的溶解异常细胞的活性。使用免疫细胞(包括NK细胞) 来治疗癌症是近年来的新趋势，经过CAR结构修饰后的NK细胞，能够高效的识别肿瘤细胞，并通过释放杀伤介质、诱导靶细胞凋亡等多种手段杀伤肿瘤细胞。这种新疗法有望为对传统手术、化疗和放疗无效的肿瘤提供了新的治愈希望。

发明内容

本发明提供了一种脐带血来源的CAR-NK细胞，所述CAR-NK细胞能够提高肿瘤细胞的杀伤效率和临床治疗的安全性、有效性；同时，本发明还提供了所述一种CAR-NK在制备药物中的应用，从而提供了一种具有应用前景的安全、可靠、高效肿瘤治疗的新手段。

CAR

本发明提供了一种包含抗CD19的特异性抗体的CAR。

优选地，所述抗CD19的特异性抗体包含重链可变区和轻链可变区。

优选地，所述重链可变区包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的CDR。

优选地，所述SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的CDR分别是SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的第26-33位，51-57位，96-109位。

优选地，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的CDR。

优选地，所述SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的CDR分别是SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列的的第27-32位，第50-51位，第89-97位。