[发明专利]用于体内组织器官再生的干细胞灌注营养液及其应用方法

说明书

本发明涉及组织器官再生技术领域，公开了一种用于体内组织器官再生的干细胞灌注营养液及其应用方法，原料包括骨髓基质干细胞、重组人碱性成纤维细胞生长因子、人重组骨形态发生蛋白、地塞米松、维生素D3，其应用是将干细胞灌注营养液灌注于滨珊瑚支架上，以形成复合物，具有修复实质器官的作用。

技术领域

本发明涉及组织器官再生技术领域，具体涉及一种用于体内组织器官再生的干细胞灌注营养液及其应用方法及其提取装置。

背景技术

大节段负重骨缺损的再生修复极为困难，采用自体骨移植会带来出血、感染及新的损伤，且来源有限。由创伤、感染、肿瘤、烧伤等引起的大块骨缺损是临床治疗的棘手问题，采用传统的自体骨或同种异体骨移植及生物材料填充，由于存在种种弊端，治疗效果均不理想，严重限制了其临床应用。

近年来，以骨髓基质干细胞(BMSC)为核心的组织工程骨移植治疗大段骨缺损已成为研究热点。骨髓基质干细胞(BMSCs)是未分化多潜能干细胞，在组织再生领域有巨大潜力，具有多向分化潜能，能够向成骨系细胞、成纤维细胞、网状细胞、脂肪细胞和内皮细胞等分化。BMSC可来源于机体各部分骨髓。

但种子细胞由于面临血供重建的困难以及炎症因子、氧自由基等的毒性作用，使得细胞成活困难、成骨效率低下。大块组织工程骨血管化以及生长因子持续稳定的释放等关键性技术难题至今未找到理想的解决办法，采用常规思路对大块骨缺损进行修复遇到了巨大的挑战。为解决这些难题，中国专利，公告号为：CN101091804A，体内灌注诱导骨髓基质干细胞构建组织工程骨的方法，公开了骨髓基质干细胞的提取、分离和培养，珊瑚复合人工骨的制备，灌注系统的建立。但是，该系统不够完善，导致成骨较为缓慢。

发明内容

本发明意在提供一种用于体内组织器官再生的干细胞灌注营养液，以解决上述难题。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：一种用于体内组织器官再生的干细胞灌注营养液，原料包括骨髓基质干细胞、重组人碱性成纤维细胞生长因子、人重组骨形态发生蛋白、地塞米松、维生素D3。

优选的，作为一种改进，骨髓基质干细胞为1×10⁶～1×10⁷个/ml，重组人碱性成纤维细胞生长因子为2ng/ml，人重组骨形态发生蛋白为25ng/ml，地塞米松为0.25～1.0mg/ml，维生素D3为1～2mg/ml。

优选的，作为一种改进，获取骨髓基质干细胞，包括如下步骤：

S1：用含有肝素抗凝液的注射器获取骨髓血200ml，将获取的骨髓血打入医用无菌采血袋中，以备用；

S2：将骨髓血与等体积的PBS混合，并且在室温条件下静置30min，然后用水平离心机在1000～2000r/min条件下离心，弃上清取细胞，细胞用PBS清洗2次；再用弃去上清液等量的培养基培养悬浮细胞，细胞中有核细胞数在(1～2)×10⁷个/ml。

优选的，作为一种改进，S2中，吸取密度位1.073g/ml Percoll溶液，使其与分离液比例为1：1；用水平离心机2000r/min离心20～40min，使离心管内液体分从上至下依次为三层，上层为血小板、中层为分离液、底层为红细胞和多核白细胞，在上、中层液体界面处可见乳白色混浊的单个核细胞层；

使用吸管插入到上、中层液体界面处的单个核细胞层，沿试管边缘吸取有核细胞移入另一离心管中；用≥5倍的培养基悬浮细胞，利用水平离心机在2000r/min条件下离心10min，弃上清液。