[发明专利]一种西瓜多倍体诱导及鉴定方法

说明书

本发明涉及一种西瓜多倍体诱导及鉴定方法，包括以下步骤：(1)、多倍体诱导；(2)、形态学鉴定；(3)、流式细胞术鉴定。其利用诱变剂秋水仙素处理西瓜子叶，以期获得西瓜较高的多倍体诱导率，为西瓜种质资源的创制提供技术支持；同时对西瓜倍性鉴定的方法进行改良，为下一步大规模高效鉴定提供了基础和依据。

技术领域

本发明属于农业技术领域，涉及的是一种西瓜培育方法，具体涉及一种西瓜多倍体诱导及鉴定方法。

背景技术

西瓜[Citrullus lanatus(Thunb.)Matsum.et Nakai]属葫芦科(Cucurbitaceae)，原产于非洲南部的热带草原区，是一种重要的瓜果作物，其肉质甜美多汁。西瓜的常规生产育苗是通过种子繁殖，但由于西瓜遗传基础狭窄、种质资源相对缺乏，常规遗传育种费时费力，导致很多重要的优良性状无法通过常规育种方法进行改良。

因此，采用生物技术手段进行种质资源创新，培育优质、高产、抗性强的新品种已成为西瓜遗传育种的研究热点。其中，离体培养技术已成为生物技术的重要组成部分。

在西瓜离体培养中，多倍体诱导及鉴定是非常重要的。但是，目前的多倍体诱导方法存在一定缺陷，导致其出芽率和多倍体诱导率不高，难以满足现在西瓜离体培养的需求。

而且，以往传统试验中，对西瓜多倍体鉴定通常采用染色体鉴定法。但染色体鉴定法耗时耗力，不适合大规模批量鉴定，难以满足西瓜大规模培育的要求。

鉴于现有技术的上述技术缺陷，迫切需要研制一种西瓜多倍体诱导及鉴定方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点，提供一种西瓜多倍体诱导及鉴定方法，其利用诱变剂秋水仙素处理西瓜子叶，以期获得西瓜较高的多倍体诱导率，为西瓜种质资源的创制提供技术支持；同时对西瓜倍性鉴定的方法进行改良，为下一步大规模高效鉴定提供了基础和依据。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种西瓜多倍体诱导及鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、多倍体诱导：选取西瓜完整子叶为材料，浸泡在质量分数为0.06-0.08％的秋水仙素溶液中，浸泡时间为3d；浸泡结束后在超净工作台上用无菌水震荡冲洗5次，之后接种到诱导培养基上；

(2)、形态学鉴定：对诱导出的不定芽进行一代增殖培养，获得西瓜植株，并对西瓜植株进行形态学鉴定，初步筛选出多倍体植株；

(3)、流式细胞术鉴定：选取初步筛选出来的多倍体植株的真叶 0.2g，放置于培养皿里，加入LB01解离液0.5mL，将真叶叶片浸没在解离液里并用刀片切碎，使切碎后的真叶叶片吸取培养皿内的解离液以使真叶叶片中的细胞核进入解离液；10min后用400目的滤膜过滤后将过滤液放入离心管内并放入4℃冰箱中，孵育5min后离心5min，弃上清后，再加入70μL的LB01解离液和130μL的染料，然后置于4℃冰箱中，避光，染色10min，最后，移至流式细胞仪检测，通过流式细胞仪观测进行多倍体鉴定。

优选地，其中，所述步骤(1)中，在浸泡时要放在摇床上震荡，并且，浸泡时的温度为28℃，摇床的转速为100r/min。

优选地，其中，所述步骤(1)中，所述诱导培养基是以MS培养基为基础，加入0.5mg/L的6-BA和0.05mg/L的TDZ。

优选地，其中，所述步骤(3)中，离心时的转速为1000r/min，温度为5℃。

优选地，其中，所述步骤(3)中，所述染料为碘化丙啶。