[发明专利]一种诊断维持性血液透析患者肌少症的肠道菌群

说明书

本发明公开了一种诊断维持性血液透析患者肌少症的肠道菌群，所述肠道菌群中至少包括巨单胞菌属Megamonas；本发明MHD肌少症患者Megamonas相对丰度显著降低（P＜0.001）。Megamonas对MHD肌少症的诊断价值用ROC及AUC表示，AUC为0.787，灵敏度为0.867，特异度为0.800，表明Megamonas对MHD肌少症的诊断效能较高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种诊断维持性血液透析患者肌少症的肠道菌群。

背景技术

肌少症是一组以骨骼肌质量下降，同时存在肌肉力量减弱和/或躯体功能降低为主要特点的退行性综合征。维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者由于肾脏疾病、透析治疗和慢性炎症导致蛋白质负平衡，加之饮食限制和体力活动减少等因素导致发生肌少症风险很高。肌少症不仅降低MHD患者躯体功能、损害日常生活能力、导致患者生活质量下降，而且增加了住院风险和住院费用，甚至是MHD患者死亡率的独立预测因子，给家庭和社会带来较大的负担。

肠道菌群能够产生多种影响人体健康的代谢物，继而影响宿主的健康状态。既往研究认为肠道菌群通过直接影响宿主的炎症环境、营养物质的生物利用度、脂质代谢和能量供应，影响宿主的肌肉质量和功能，但是主要是基于动物模型，人体研究有限，且没有研究直接探索MHD肌少症人群肠道菌群的特征。研究MHD肌少症患者肠道菌群的特点，找出与肌少症相关的标志菌属，对于揭示MHD肌少症的发病机制以及实现肌少症的诊断和治疗具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供与液透析患者肌少症发生发展相关的肠道菌群，用于诊断和治疗血液透析患者肌少症。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种诊断维持性血液透析患者肌少症的肠道菌群，所述肠道菌群中至少包括巨单胞菌属Megamonas。

一种筛选维持性血液透析患者肌少症的肠道菌群的方法，所述方法如下：

步骤1：分别收集血液透析肌少症患者和血液透析非肌少症患者的新鲜粪便，采样后立即放入-80℃保存备检；

步骤2：16S rRNA测序，针对采样提取基因组DNA，用琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA的质量；

步骤3：用引物338F和806R对细菌16S rRNA的V3-V4可变区进行PCR扩增；PCR产物按等比例混合，然后用DNA纯化柱进行过柱纯化；

步骤4：根据IlluminaMiSeq平台标准操作规程将纯化后的扩增片段构建文库；利用Hiseq2500平台进行测序；

步骤5：使用FLASH 1.2.11软件对原始测序序列进行拼接,使用Trimmomatic 0.33软件质量过滤，使用UCHIME 8.1软件去除嵌合体，得到高质量的Tags序列；

步骤6：使用USEARCH 10.0软件在相似性97％的水平上对序列进行OTU聚类，并在聚类的过程中去除单序列和嵌合体；利用RDP classifier在97％的水平下的OTU进行生物信息统计分析，利用Silva数据库(SSU123)进行比对；

步骤7：采用SPSS 26.0软件的Kruskal-Wallis秩和检验分析组间差异菌群，组间差异菌群即为巨单胞菌属Megamonas，并采用ROC曲线和曲线下面积评估差异菌属对MHD肌少症的诊断价值。

优选地，用1.8％琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA的质量，DNA的质量包括DNA的浓度和纯度。

优选地，Megamonas的靶核苷酸序列是16SrRNA基因的片段。

一种预测维持性血液透析肌少症的试剂盒，所述试剂盒包含检测巨单胞菌属Megamonas丰度的试剂。