[发明专利]一种人原发性骨髓纤维化细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一种人原发性骨髓纤维化细胞株及其构建方法和应用。原发性骨髓纤维化细胞株命名为人原发性骨髓纤维化细胞株ZYXY‑M2，于2021年1月20日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉大学，中国武汉)，保藏编号为CCTCC NO:C202145。本发明通过从临床原发性骨髓纤维化患者外周血提取分离得到单个核细胞，体外培养连续自然传代而得到。该白血病细胞株JAK2、CALR、MPL突变阴性，ASXL1突变阳性,TP53突变阳性,IKZF1突变阳性，IDH1突变阳性，FLT3突变阳性，TET1突变阳性。具有良好的体外增殖能力，可作为研究人原发性骨髓纤维化发生发展机制研究及个体化治疗体外研究的细胞材料，同时可用于体内外研究人原发性骨髓纤维化药物筛选、评估，指导临床用药。

技术领域

本发明涉及生物学和肿瘤学领域，具体涉及一种人骨髓纤维化细胞株及其构建方法和应用。

背景技术

血液系统源于髓系的恶性肿瘤依据发病时原始细胞分化水平、比例及细胞形态及分子特点分为急性髓系白血病及其相关肿瘤和慢性髓系肿瘤。慢性髓系肿瘤中最常见是BCR-ABL融合基因阳性的慢性髓系白血病和BCR-ABL阴性的骨髓增殖性肿瘤(MPN)。MPN中最为常见的是真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)和原发性骨髓纤维化(PMF)三种疾病。研究表明JAK2、CALR、MPL突变在PV、ET、PMF检测阳性的概率为：PV患者中分别为95％、0％、0％,ET患者中分别为60％、20％、3％,PMF患者中分别为60％、25％和7％。尽管在基因水平上三种疾病存在很多的相同，但是三种疾病在骨髓的病理、临床表现、疾病进展速度、临床转归及预后上具有明显的不同。

原发性骨髓纤维化(PMF)是MPN中以干细胞衍生的克隆性骨髓增殖为特征，通常但不总是伴有JAK2、CALR或MPL突变，约10％-15％的呈现JAK2、CALR或MPL突变阴性。临床特征包括骨髓网状蛋白/胶原纤维化、异常的炎性细胞因子表达、贫血、肝脾肿大、髓外造血(EMH)、全身症状(如疲劳、夜间出汗、发热)、恶病质、白血病进展和生存期缩短。相较于PV和ET，PMF的预后最差。研究表明三种疾病的总体中位生存时间PV是20年，ET是14年，PMF仅有6年。对于PMF目前为止国际上共先后提出5种预后分层体系，对于高危的PMF其中位生存时间不足2年。死亡原因包括大约20％的患者发生白血病进展，许多患者也死于合并症，包括心血管事件和血细胞减少症的后果，包括感染或出血。

当前PMF治疗手段极其有限，异基因造血干细胞移植(AHSCT)是当前唯一可以延长患者生存时间或使患者治愈的方法，但是接受AHSCT的患者至少存在50％的移植相关严重并发症或移植相关死亡。因此，对于个体患者，必须权衡AHSCT的风险与未进行AHSCT的预期生存率。研究表明，PMF患者匹配相关移植的5年无病生存率(DFS)和治疗相关死亡率(TRM)分别为33％和35％，无关移植分别为27％和50％，复发率高达29％。PMF传统药物治疗包括羟基脲和鲁索替尼，但是仅限于改善患者的临床症状，没有抗肿瘤活性，也没有已被证明可以逆转骨髓纤维化或诱导细胞遗传学或分子缓解。PMF患者对羟基脲和鲁索替尼有反映的仅在15％～25％,反应时间也仅持续1年左右。近年来新的JAK抑制剂，如费拉替尼、莫莫替尼和帕克替尼目前正在进行临床实验，也仅作为鲁索替尼耐药的替代治疗。由此可知当前PMF的药物治疗仅作为姑息性的治疗手段。JAK2突变在PMF中占65％左右，也有待进一步发掘JAK2阴性患者的治疗药物。

PMF的预后及转归与其分子特点密切相关。研究表明JAK2、CALR或MPL突变可能介导了PMF的骨髓纤维化，但是其向白血病的转化可能与其他基因突变相关，如TET2、ASXL1、IDH1/2、EZH2、DNMT3A、CBL、RAS、IKZF1、TP53、SF3B1、SRSF2、U2AF1基因均在PMF发现。ASXL1、SRSF2、EZH2、IDH1、IDH2、U2AF1Q157被纳入PMF的危险分层体系中。