[发明专利]RNA-导向的转录调控在审
| 申请号： | 202110830978.0 | 申请日： | 2014-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN113846096A | 公开（公告）日： | 2021-12-28 |
| 发明（设计）人： | 乔治·M·丘奇;普拉尚特·G·马利;凯文·M·埃斯弗特 | 申请（专利权）人： | 哈佛大学校长及研究员协会 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/55;C12N15/10;C12N15/90;C12N15/63 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 杨昀;余颖 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | rna 导向 转录 调控 | ||
1.一种改变细胞中DNA靶标核酸的方法，包括
向所述细胞引入编码两种或更多种RNA的第一外源核酸，其中每种RNA与所述DNA靶标核酸中相邻位点互补，
向所述细胞引入编码至少一种Cas9蛋白切口酶的第二外源核酸，所述Cas9蛋白切口酶具有一个非活性核酸酶结构域并由所述两种或更多种RNA导向，且
其中表达所述两种或更多种RNA和所述至少一种Cas9蛋白切口酶，并且其中所述至少一种Cas9蛋白切口酶与所述两种或更多种RNA共定位至所述DNA靶标核酸，并且切割所述DNA靶标核酸，从而导致产生两个或更多个相邻切口。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述两个或更多个相邻切口在双链DNA的相同链上。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述两个或更多个相邻切口在双链DNA的相同链上并导致产生同源重组。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述两个或更多个相邻切口在双链DNA的不同链上。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述两个或更多个相邻切口在双链DNA的不同链上并且产生双链断裂。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述两个或更多个相邻切口在双链DNA的不同链上并且产生双链断裂，从而导致非同源末端接合。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述两个或更多个相邻切口在双链DNA的不同链上并且彼此之间相对偏移。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述两个或更多个相邻切口在双链DNA的不同链上并且彼此之间相对偏移，并产生双链断裂。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述两个或更多个相邻切口在双链DNA的不同链上并且彼此之间相对偏移，并产生双链断裂，从而导致非同源末端接合。
10.根据权利要求1所述的方法，还包括向所述细胞引入编码供体核酸序列的第三外源核酸，其中所述两个或更多个切口导致产生所述靶标核酸与所述供体核酸序列的同源重组。
11.一种细胞，包括
编码两种或更多种RNA的第一外源核酸，其中每种RNA与DNA靶标核酸中相邻位点互补，和
编码至少一种具有一个非活性核酸酶结构域的Cas9蛋白切口酶的第二外源核酸，并且其中所述两种或更多种RNA和所述至少一种Cas9蛋白切口酶是所述DNA靶标核酸的共定位复合物的元件。
12.根据权利要求11所述的细胞，其中所述细胞是真核细胞。
13.根据权利要求11所述的细胞，其中所述细胞是酵母细胞、植物细胞或动物细胞。
14.根据权利要求11所述的细胞，其中所述RNA包括约10至约500个核苷酸。
15.根据权利要求11所述的细胞，其中所述RNA包括约20至约100个核苷酸。
16.根据权利要求11所述的细胞，其中所述靶标核酸与疾病或有害状况有关。
17.根据权利要求11所述的细胞，其中所述两种或更多种RNA是向导RNA。
18.根据权利要求11所述的细胞，其中所述两种或更多种RNA是tracrRNA-crRNA融合体。
19.根据权利要求11所述的细胞，其中所述DNA靶标核酸是基因组DNA、线粒体DNA、病毒DNA或外源DNA。
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