[发明专利]一种简便快速分离荔枝霜疫霉菌的方法

权利要求书

1.一种分离荔枝霜疫霉菌的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）取荔枝病果，切下破损部分作为病组织，消毒；

（2）按重量份数计，取8~12份V8蔬菜汁，加入85~95份水，灭菌冷却后，得V8蔬菜培养基，加入0.01~0.02份氨卞青霉素、0.01~0.02份咪鲜胺和0.01~0.02份恶霉灵，混匀，得选择性培养基；所述选择性培养基还包括促生剂4~8份，该促生剂在V8蔬菜培养基灭菌冷却后加入，所述促生剂按质量百分比，由β-谷甾醇母液10~15%、荔枝皮研出液40~50%和余量为水混合而成；

所述β-谷甾醇母液是由质量比为10~15：1~2的β-谷甾醇和二氯甲烷混合所得；

所述荔枝皮研出液是由荔枝皮加入pH值6.5~7.5、0.18~0.2M的磷酸缓冲溶液研磨过滤而得；所述荔枝皮与磷酸缓冲溶液的料液质量比为2~3：4~5；

（3）切取病组织内果皮的病健交界处组织，置于选择性培养基中，22~28℃培养2-4 d，挑取菌丝，镜检，接种至新的选择性培养基，22~28℃培养3-5 d，得菌落；

（4）从菌落上切下菌丝块，置于新的V8蔬菜培养基中，22~28℃培养1-2 d，得荔枝霜疫霉菌。

2. 如权利要求1的一种分离荔枝霜疫霉菌的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，所述菌丝块是由菌落边缘呈放射状单菌丝的尖端切下，所述菌丝块的长度为≤0.5 cm。

3. 如权利要求1的一种分离荔枝霜疫霉菌的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，所述菌丝块还包括浸泡处理，将从菌落边缘呈放射状单菌丝的尖端切下菌丝块，加入荔枝皮研出液浸泡5~10 min后，取出，置于新的V8蔬菜培养基中培养。