[发明专利]一种磁微粒化学发光法检测高尔基体蛋白73的试剂盒及制备方法

说明书

本发明公开了一种磁微粒化学发光法检测高尔基体蛋白73的试剂盒及制备方法。属于免疫分析技术领域。试剂盒包括：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮溶液，生物素化标记GP73抗体溶液、碱性磷酸酶标记高尔基体蛋白73抗体溶液、校准品、洗液和底物溶液。本发明避免组织学检测需取得病理标本，对未取得癌组织病理的患者就无法判断其GP73状态，也难以多次检测的问题。利用血清学检测具有方便、可重复测量、定量、客观以及可以实时检测等特点。反应时间短，避免了放射性污染，简化了实验操作流程，生物素与链霉亲和素之间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。因此，在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。

技术领域

本发明涉及免疫分析技术领域，更具体的说是涉及一种磁微粒化学发光法检测高尔基体蛋白73的试剂盒及制备方法。

背景技术

肝细胞癌是一种恶性程度高、进展快、预后差、侵袭性强的恶性肿瘤。甲胎蛋白(AFP)是诊断肝细胞癌的重要指标，但30％左右的肝细胞癌患者AFP检测结果为阴性。

高尔基体蛋白73(GP73)是新近发现的一种肝细胞癌相关蛋白，日益增多的研究表明，其在肝癌的诊断和鉴别诊断中具有重要的应用价值，是一种潜在的肿瘤标志物。

高尔基体蛋白73(GP73)，又称为Ⅱ性高尔基体跨膜蛋白(GOLPH2)或高尔基体膜蛋白Ⅰ(GOLM1)，分子量73KD，恒定表达于正常肝脏的胆管上皮细胞，肝实质细胞很少或不表达。用于已经组织学确诊的肝癌患者的病情监测及疗效评价，不能作为恶性肿瘤早期诊断或确诊的依据，不用于普通人群的肿瘤筛查。

因此，如何检测高尔基体蛋白73是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种磁微粒化学发光法检测高尔基体蛋白73的试剂盒及制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种磁微粒化学发光法检测高尔基体蛋白73的试剂盒，包括：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮溶液，生物素化标记GP73抗体溶液、碱性磷酸酶标记高尔基体蛋白73抗体溶液、校准品、洗液和的底物溶液。

进一步的：底物溶液包括200～2000mg/L((4氯苯基)硫代)(10甲基吖啶9(10H)亚基)甲基磷酸二钠、2～200mg/L光泽精、200～2000mg/L亚硫酸钠、0.1％～0.5％ProClin300和0.1～0.5mol/L Tris缓冲液。

优选的：生物素化标记GP73抗体溶液的制备方法包括以下步骤：

1)量取GP73抗体和生物素-NHS备用；

2)将生物素-NHS用DMSO进行溶解后，加入GP73抗体充分混匀；

3)将步骤2)的反应产物透析，得混合物，并用抗试剂缓冲液稀释得生物素化标记GP73抗体溶液。

优选的：GP73抗体为单克隆抗体；GP73抗体和生物素-NHS的摩尔比为0.8～1.2：20；生物素-NHS用DMSO溶解后的终浓度为5mg/ml；反应的时间为2h；透析的透析袋规格为分子量500；透析缓冲液为PH＝7.5的0.15M PBS缓冲液，抗试剂缓冲液为0.15M pH 7.3磷酸盐缓冲液，1％牛血清白蛋白，0.1％ProClin300；稀释的程度至混合物为0.5μg/ml。

有益效果在于：生物素与链霉素-亲和素体系结合亲和力高，反应高度专一，提高灵敏度，利用透析去除杂质，从而不增加非特异性结合。

优选的：碱性磷酸酶标记高尔基体蛋白73抗体溶液的制备方法包括以下步骤：

1)将高尔基体蛋白73抗体用0.1M PBS进行透析，用2-亚氨基硫烷盐酸盐，活化；

2)将碱性磷酸酶用(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯活化；