[发明专利]一种人MTHFR基因C667T位点多态性检测试剂盒

权利要求书

1.一种人MTHFR基因C667T位点多态性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如SEQID No.1-2所示的MTHFR基因C667T正向扩增引物和MTHFR基因C667T反向扩增引物，以及如SEQ IDNo.3所示的MTHFR基因C667C探针，如SEQ ID No.4所示的MTHFR基因C667T探针；如SEQ ID No.5-6所示的内参正向扩增引物和内参反向扩增引物，以及如SEQ ID No.7所示的内参探针；所述MTHFR基因C667C探针、MTHFR基因C667T探针和内参探针的5’端分别标记FAM荧光基团、VIC荧光基团、ROX荧光基团中的一种，且所述三种探针标记的荧光基团互不相同，3’端标记MGB；以及PCR反应液，所述引物和探针的浓度为0.1-1μmol/L，所述PCR反应液中MgCl₂终浓度为1.5-2.0mM，dNTPs终浓度为100-200nM，热启动DNA聚合酶浓度为1-2U/反应；

所述试剂盒中还包括样品稀释液，所述样品稀释液为二甲基亚砜与烷基酰胺配制得到的水溶液，二甲基亚砜浓度为0.05mg/mL，烷基酰胺浓度为0.1mg/mL，所述烷基酰胺为烷基酰胺甜菜碱或者N.N-双羟乙基烷基酰胺；

所述试剂盒的应用方法包括如下步骤：

(1)DNA提取：从待测样本中提取基因组DNA，浓度为0.4-10ng/μL；

(2)以提取的基因组DNA作为模板进行荧光PCR扩增；

(3)根据扩增曲线的CT值判断MTHFR C667T位点的基因型，结果判读参考标准如下：

野生型：C667C探针22≤CT值≤35；C667T探针CT值≥35；内参探针CT值≤35；

突变型：C667C探针CT值≥35；C667T探针19≤CT值≤35；内参探针CT值≤35；

杂合型：C667C探针22≤CT值≤35；C667T探针19≤CT值≤35；内参探针CT值≤35；

实验失败：内参探针CT值≥35。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述引物的浓度为0.3μmol/L，探针浓度为0.5μmol/L，MgCl₂终浓度为1.5mM，dNTPs终浓度为100nM，热启动DNA聚合酶浓度为2U/反应。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述烷基酰胺为N.N-双羟乙基烷基酰胺。