[发明专利]一种树突状细胞的制备方法

权利要求书

1.一种树突状细胞的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(一)分离人体单个核细胞；

(二)在适合细胞生长和增殖的条件下，诱导制备DCreg细胞，具体如下：

(1)接种：步骤(一)所得人体单个核细胞，用基础培养基贴壁培养，筛选出贴壁细胞，加入DC培养基；所述DC培养基，是由基础培养基、重组人GM-CSF和重组人IL-4组成的，其中，重组人GM-CSF的终浓度为500～1000IU/ml，重组人IL-4的终浓度为800～1000IU/ml；

(2)培养第3天，补加DC培养基；

(3)培养第5天，向培养物中加入5～12ug/ml的间充质干细胞外泌体，50～200ng/ml的vEGF，5～12ng/ml的TGF-β和300～800IU/mL的IL-10；

(4)培养第7天，即得DCreg细胞。

2.根据权利要求1所述的树突状细胞的制备方法，其特征在于：所述基础培养基，选自KBM581培养基。

3.根据权利要求1所述的树突状细胞的制备方法，其特征在于：所述重组人GM-CSF的终浓度为800IU/ml；

和/或：所述重组人IL-4的终浓度为1000IU/ml。

4.根据权利要求1所述的树突状细胞的制备方法，其特征在于：所述间充质干细胞外泌体的浓度为10ug/ml；

和/或：所述vEGF的浓度为100ng/ml；

和/或：所述TGF-β的浓度为10ng/ml；

和/或：所述IL-10的浓度为600IU/mL。

5.根据权利要求1所述的树突状细胞的制备方法，其特征在于：所述分离人体单个核细胞的具体方式如下：

(1)无菌采集外周血100ml于抗凝剂的采血袋中；

(2)分离血浆；

(3)血浆灭活；

(4)稀释：用0.9％生理盐水稀释去除血浆后血液到30ml，混匀；

(5)铺样：血样以2:1比例缓慢匀速加入人淋巴细胞分离液上层，离心；

(6)提取单个核细胞：离心后，离心管内出现明显的分层，吸取单个核细胞层；

(7)第一遍洗涤：生理盐水与单个核细胞混合，离心；

(8)第二遍洗涤：生理盐水洗涤，离心。

6.根据权利要求1所述的树突状细胞的制备方法，其特征在于：所述用基础培养基贴壁培养的具体方式为：以1*10^6/cm²的细胞密度接种于培养瓶，5％CO₂、37℃恒温培养箱孵育2h。

7.利用权利要求1～6中任一项所述的制备方法制备得到的树突状细胞。

8.权利要求7所述的树突状细胞在作为/制备活体移植、辅助生殖所用的移植细胞中的用途。