[发明专利]一种共提取不同样本的DNA和RNA的方法

说明书

本发明公开了一种共提取不同样本的DNA和RNA的方法，属于分子生物学领域，方法包括如下步骤：步骤一，液化样本；步骤二，在液化的样本中加入酶；步骤三，加入裂解液，加入步骤二的上清液；裂解液包括：二硫苏糖醇和异硫酸氰胍；步骤四，加入无水乙醇，混匀加入磁珠；步骤五，吸弃离心管上清液；步骤六，将离心管中加入洗涤液，混匀后吸弃上清液；步骤七，在离心管中加入80%乙醇，混匀后弃上清液；步骤八，得到DNA/RNA混合液；本发明能够同时提取DNA/RNA，实现较全面地获取病原微生物，快速检测出感染源，增加病原识别的准确性。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是一种共提取不同样本的DNA和RNA的方法。

背景技术

临床样本的检验传统检测方法为培养法，但该方法时间长，且阳性率低，无法满足现在的需求。以核酸物质为基础的分子生物学技术克服了培养技术的限制，为临床病原微生物的检测提供了强有力的手段。随着分子生物学技术的深入发展，在基因水平上对疾病进行诊断已经成为临床诊断技术的一项基本技术手段。

但对于临床样本的检测来说，针对一种样品要做到多种病原微生物的检测，不仅包括DNA也包括RNA，因此设计一种适用于不同样本DNA/RNA共提取技术很重要。

目前核酸提取的方法有以下几种：

(1)无酚氯仿法、苯酚-氯仿法

这两种方法也称为“有机溶剂法”，是纯液相方法中最经典的方法。主要是利用酚-氯仿使蛋白质变性，通过离心从而来去除蛋白质。该方法虽然耗时短，但步骤比较多，易使核酸断裂。

(2)尿素法

尿素对氨基酸具有增溶作用，能形成氢键，他能够使蛋白质的疏水残基伸展和溶解性加强，高浓度的尿素可使蛋白质变性并抑制核酸酶活性。该方法虽然过程较温和，操作步骤少但该方法容易造成DNA变性降解。

(3)磁珠法

在反应体系中，核酸分子中的负电基团会特异性吸附在磁珠表面。但当反应溶液吸出，加入水性分子时会使核酸分子水化，使吸附到磁珠上的核酸分子被纯化出来，磁珠法提纯核酸不需要使用有机溶剂，操作安全简单，非常有利于核酸的自动化和高通量提取，符合核酸自动化提取要求，是核酸纯化方法发展的重要方向。

目前市场有很多关于分别提取DNA、RNA的方法，但无法将DNA和RNA共同提取。市场需要一种适用于不同样本的DNA/RNA共提取方法。该方法不仅能够完成DNA/RNA的共提取，又不会使提取率降低；本发明解决这样的问题。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种共提取不同样本的DNA和RNA的方法，本发明能够同时提取DNA/RNA ，实现较全面地获取病原微生物，快速检测出感染源，增加病原识别的准确性。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种共提取不同样本的DNA和RNA的方法，包括如下步骤：

步骤一，将临床样本加入到离心管中作为样本，向离心管中加NaOH溶液液化样本；

步骤二，在液化的样本中加入酶并研磨，离心，取上清液；

步骤三，取离心管加入裂解液，离心后加入步骤二的上清液，振荡、离心、孵育、离心；

裂解液包括：二硫苏糖醇和异硫酸氰胍；

步骤四，在离心管中加入无水乙醇，混匀，加入磁珠，静置；

步骤五，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附至管壁后吸弃上清液；

步骤六，将离心管中加入洗涤液，振荡，置于磁力架上，待磁珠完全吸附至管壁后吸弃上清液；

步骤七，在离心管中加入80%乙醇，混匀后置于磁力架，待磁珠完全吸附至管壁后吸弃上清液，打开EP管，晾干；

步骤八，在离心管中加入洗脱液，混匀后孵育，置于磁力架上，待磁珠完全吸附至管壁后吸取上清液于新的离心管中，即得到DNA/RNA混合液。