[发明专利]一种检测ATP、谷胱甘肽、Fpg糖基化酶的通用荧光传感器有效
| 申请号： | 202110835567.0 | 申请日： | 2021-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN113552106B | 公开（公告）日： | 2022-12-30 |
| 发明（设计）人： | 黄加栋;朱志学;王玉;刘素;王业茹;孙文玉;张曼茹;江龙;李静静;张清心;徐婉晴 | 申请（专利权）人： | 济南大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 王翠翠 |
| 地址： | 250022 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 atp 谷胱甘肽 fpg 糖基化酶 通用 荧光 传感器 | ||
1.一种检测ATP、谷胱甘肽及Fpg糖基化酶的通用荧光生物传感器，其特征在于，包含ATP block链，GSH block链，Fpg block链，Apt1，Apt2，Cas12a蛋白，S链，FQ链、sgRNA；
所述的sgRNA序列为SEQ ID No:1；
所述的ATP block序列为SEQ ID No:2；
所述的GSH block序列为SEQ ID No:3；
所述的Fpg block序列为SEQ ID No:4；
所述的Apt1序列为SEQ ID No:5；
所述的Apt2序列为SEQ ID No:6；
所述的S序列为SEQ ID No:7；
所述的FQ序列为SEQ ID No:8；
所述的GSH block链的中间修饰有二硫键，Fpg block链的5’端的第八个碱基修饰有8oxo-G，FQ链的5’末端与3’末端分别修饰有荧光基团与淬灭基团。
2.根据权利要求1所述的检测ATP、谷胱甘肽及Fpg糖基化酶的通用荧光生物传感器，其特征在于，所述的ATP block与sgRNA的摩尔比为1:1。
3.根据权利要求1所述的检测ATP、谷胱甘肽及Fpg糖基化酶的通用荧光生物传感器，其特征在于，所述的GSH block与sgRNA的摩尔比为1:1。
4.根据权利要求1所述的检测ATP、谷胱甘肽及Fpg糖基化酶的通用荧光生物传感器，其特征在于，所述的Fpg block与sgRNA的摩尔比为1:1。
5.根据权利要求1所述的检测ATP、谷胱甘肽及Fpg糖基化酶的通用荧光生物传感器，其特征在于，所述的Apt1、Apt2、ATP block的摩尔比为1:1:1。
6.权利要求1所述的检测ATP、谷胱甘肽及Fpg糖基化酶的通用荧光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将sgRNA分别与ATP block，GSH block，Fpg block退火，得到ATP Lock，GSH Lock，Fpg Lock；
（2）在步骤（1）得到的ATP Lock中加入Apt1，Apt2，Cas12a蛋白，S链，FQ链，ATP；37°C水浴锅中反应90min；65°C水浴锅中10min，终止反应；
（3）在步骤（1）得到的Fpg Lock中加入Cas12a蛋白，S链，FQ链，Fpg；37°C水浴锅中反应90min；65°C水浴锅中10min，终止反应；
（4）在步骤（1）得到的GSH Lock中加入Cas12a蛋白，S链，FQ链，GSH；37°C水浴锅中反应90min；65°C水浴锅中10min，终止反应。
7.权利要求1所述的检测ATP、谷胱甘肽及Fpg糖基化酶的通用荧光生物传感器在检测ATP、GSH、Fpg糖基化酶上的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用的具体方法为：激发波长为485nm，发射波长为520nm，电压为670V，通过荧光变化检测待测目标物。
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