[发明专利]一种伊枯草菌素Iturin9及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物活性肽技术领域，具体涉及一种伊枯草菌素Iturin9。本发明的伊枯草菌素与禽类同源，来源于鸡肠源性解淀粉芽孢杆菌，可应用于制备动物饲料或抗微生物产品，可与健脾类植物提取物联用，具有协同增效作用。本发明的伊枯草菌素对各阶段的禽类的生产性能均有显著提高，可改善肉鸡小肠绒毛结构，其作用达到甚至超过抗生素(抗敌素+速大肥)的作用，还可改善肉鸡盲肠内容物菌群结构，提高饲料转化效率，促进肉鸡的生长。本发明的伊枯草菌素为天然抗菌物质，进入同源的动物体内无副作用，无残留，可以直接全替代抗生素。且本发明的伊枯草菌素与可食用的植物提取物具有协同增效作用，为无抗养殖开辟了一条新途径。

技术领域

本发明属于生物活性肽技术领域，具体涉及一种伊枯草菌素Iturin9及其制备方法和应用。

背景技术

抗生素(antibiotic)，即“抗生物的物质”，是指由微生物(如细菌、真菌、放线菌等)或高等动植物在生活过程中所产生的通过干扰其他生物细胞(尤其微生物病原体)发育而抗目标活细胞的一类天然化学物质(如青霉素、链霉素、氯霉素、红霉素、万古霉素、四环素等“霉素”类)，后人们将模拟天然抗菌物(“霉素”类)的结构和功能而用化学合成法生产的系列抗菌物也归为抗生素。

抗生素使用的危害主要是：(1)对动物体产生直接毒负作用；(2)抗生素可入动物循环系统，可沉积于动物各组织上，具有药物残留性动物产品上的药物残留会危害消费者；(3)抗生素作用靶是易发生突变的靶点，诱发耐药菌产生和耐药基因的扩散，且所产生的耐药基因易发生横向和纵向的转移，从而产生人类公共安全问题。

“抗微生物阳离子肽CAMP”是一类由生物(微生物或植物或动物)在受生存胁迫下为反抗胁迫因子(病原体或生存竞争者)而外泌的一种肽，常被人们简称为“抗菌肽”。但由于此类肽往往也对真菌类具抑杀作用，故也被人们称为“抗微生物肽”。再者，此类活性肽在生理条件下(近酸碱中性的溶液中)呈正电性，故也被人们称为“抗微生物阳离子肽CAMP”。在宿主对抗病原微生物的基本防卫系统中起着重要的作用，可由真核生物、原核生物或噬菌体基因组编码。由于其具有来源多、抗菌谱广、大多异于传统抗生素的作用模式、杀菌力强、安全性好(如在远高于有效浓度时仍不会引起红细胞或淋巴细胞的裂解)，在大小、结构和特异性上也具有很大的差异性等特性，使其已成为抗生素替代品研发的重要资源。

Cecropin(天蚕素抗菌肽)作为抗菌肽的典型代表，由于其对G+和G-菌均具杀灭作用，具较广的抗菌谱，目前学者们对其研究最多。曾以基因工程法成功在酵母中生产出具高杀菌力的CecropinAD产品(表达活性高达6000AU/m1)，并试图将其开发成抗生素替代品应用于动物生产中。以酵母工程菌生产的cecropinAD制剂(去酵母菌的发酵液)添加到配合粉料中，在室温条件下贮存30天后可降低饲料细菌总数50％，但对饲料霉菌数无显著影响(何丹林等，2004)。以酵母工程菌生产的cecropinAD制剂(去酵母菌的发酵液)替代金霉素的肉鸭试验结果表明：cecropinAD可促进肉鸭的生长，提高产肉率，降低腹脂率(陈晓生等，2005；缪小群等，2006)。以前的试验结果表明，适宜剂量的cecropinAD可促进动物的生长，但稍高剂量却会影响动物的采食，甚至会降低饲料转化率。

动物的生长是一个十分复杂的过程。动物在其长期的自然进化过程中，于低生长密度低应激的野生态下，在其体内已建立了平衡的微生物菌群共生体，并建立了一套维持其体内菌群稳态的机制，而能抑制外源性病原菌却对其共生微生物细胞和动物自身细胞无杀伤作用的内源性抗菌物(尤其抗微生物肽)在其菌群稳态维护中起着极其重要的作用。但是，这种体内菌群稳态维护能力却不能适应已远离了野生态的高养殖密度高应激条件下的现代动物饲养态，使得动物内源抗菌物的生产量不足于维护动物自身的健康。而作为外源性的抗微生物肽，进入到动物胃肠道内后必定会打破动物体内原有的稳态，重新建立新的稳态，在重建过程一定会受到动物遗传、营养、免疫、内分泌、胃肠微生态和体外环境等诸多体内外因素的影响，甚至会与这诸多因素发生互作而影响外源性的抗微生物肽作饲用抗生素替代品的应用效果。