[发明专利]在细菌中产生双链蛋白质的方法在审
| 申请号： | 202110839713.7 | 申请日： | 2015-11-05 |
| 公开（公告）号： | CN113699203A | 公开（公告）日： | 2021-11-26 |
| 发明（设计）人： | J·朱利安诺蒂;D·赖利;K·奥罗里;L·C·西蒙斯 | 申请（专利权）人： | 基因泰克公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02 |
| 代理公司： | 北京坤瑞律师事务所 11494 | 代理人： | 岑晓东 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细菌 产生 蛋白质 方法 | ||
1.一种在原核宿主细胞中产生包含T细胞受体(TCR)α链和TCRβ链的抗癌免疫动员单克隆T细胞受体(ImmTAC)的方法，所述方法包括：
(a)在培养基中在包括以下的条件下培养所述宿主细胞以表达所述ImmTAC的TCRα链和TCRβ链：
包括生长温度和生长搅拌速率的生长期，和
包括产生温度和产生搅拌速率的产生期，借此在表达后，所述TCRα链和所述TCRβ链折叠并装配以在所述宿主细胞中形成生物活性ImmTAC；
其中所述宿主细胞包含多核苷酸，所述多核苷酸包含
(1)编码所述ImmTAC的TCRα链的第一翻译单元；
(2)编码所述ImmTAC的TCRβ链的第二翻译单元；和
(3)编码至少一种选自由肽基-脯氨酰基异构酶、蛋白质二硫化物氧化还原酶及其组合组成的组的伴侣蛋白的第三翻译单元；
其中所述生长温度高于所述产生温度2至10℃，并且所述生长搅拌速率高于所述产生搅拌速率50至250rpm；和
(b)从所述宿主细胞回收所述生物活性ImmTAC。
2.一种在原核宿主细胞中产生包含T细胞受体(TCR)α链和TCRβ链的抗癌免疫动员单克隆T细胞受体(ImmTAC)的方法，所述方法包括：
(a)在培养基中在包括以下的条件下培养所述宿主细胞以表达所述ImmTAC的TCRα链和TCRβ链：
包括生长温度和生长搅拌速率的生长期，和
包括产生温度和产生搅拌速率的产生期，借此在表达后，所述TCRα链和所述TCRβ链折叠并装配以在所述宿主细胞中形成生物活性ImmTAC；
其中所述宿主细胞包含多核苷酸，所述多核苷酸包含：
(1)编码所述ImmTAC的TCRα链的第一翻译单元；
(2)编码所述ImmTAC的TCRβ链的第二翻译单元；
(3)编码第一伴侣蛋白的第三翻译单元；
(4)编码第二伴侣蛋白的第四翻译单元；和
(5)编码第三伴侣蛋白的第五翻译单元，
其中所述第一、第二和第三伴侣蛋白选自由肽基-脯氨酰基异构酶、蛋白质二硫化物氧化还原酶及其组合组成的组；
其中所述生长温度高于所述产生温度2至10℃，并且所述生长搅拌速率高于所述产生搅拌速率50至250rpm；和
(b)从所述宿主细胞回收所述生物活性ImmTAC。
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