[发明专利]地榆及地榆炭对照提取物的制备工艺及其质量控制方法

权利要求书

1.地榆炭对照提取物的制备工艺的质量控制方法，其特征在于：包括构建所述地榆炭对照提取物的特征图谱、地榆炭对照提取物中鞣质的含量进行测定和地榆炭对照提取物中没食子酸的含量进行测定，步骤如下：

构建地榆炭对照提取物的特征图谱：

步骤A4. 分别制备地榆对照药材的参照物溶液和地榆炭对照提取物的供试品溶液；

参照物溶液的制备包括：取地榆对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加入水50ml，超声处理30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液，另取鞣花酸对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成每1ml含100μg的溶液，取没食子酸对照品适量，加水制成每1ml分别含30μg的溶液，取5-羟甲基糠醛对照品适量，加水制成每1ml分别含30μg的溶液，作为对照品参照物溶液；

供试品溶液的制备包括：取地榆炭对照提取物0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

步骤B4. 分别取参照物溶液和供试品溶液，按高效液相色谱法进行测定，得到对应的特征图谱；

按高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm；以甲醇为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱满足以下条件：0-15min，流动相A5→20%；15-25min，流动相A20→30%；25-55min，流动相A30→75%；柱温为25℃；流速为每分钟1.0ml；检测波长为272nm，理论板数按鞣花酸峰计算应不低于5000；

步骤C4. 以参照物溶液的特征图谱为参照图谱，从供试品溶液的特征图谱中选择共有峰，构建地榆炭对照提取物的特征图谱；

地榆炭对照提取物中鞣质的含量进行测定：

对照品溶液制备：精密称取没食子酸对照品，制得每1ml中含没食子酸0.05mg的对照品溶液；

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置25ml棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1ml，再分別加水11.5ml、11ml、10ml、9ml、8ml、7ml，用29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；

供试品溶液的制备：取地榆炭对照提取物0.4g，精密称定，置250ml棕色量瓶中，加水150ml，放置过夜，超声处理10分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置，滤过，弃去初滤液50ml，精密量取续滤液20ml，置100ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得；

含量测定：总酚 精密量取供试品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1ml”起，加水10ml，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的浓度，计算没食子酸的量，即得；

不被吸附的多酚 精密量取供试品溶液25ml，加至已盛有干酪素0.6g的100ml具塞锥形瓶中，密塞，置30℃水浴中保温1小时，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置25ml棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1ml”起，加水10ml，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的浓度，计算没食子酸的量，即得；按下式计算鞣质的含量：鞣质含量=总酚量-不被吸附的多酚量；

测定时，同时进行干酪素吸附空白试验，计算扣除空白值，且实验过程避光操作；

地榆炭对照提取物中没食子酸的含量进行测定：

步骤A5. 照高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05%磷酸溶液为流动相进行等度洗脱；检测波长为272nm，理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备 取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取地榆炭对照提取物0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加10%盐酸溶液20ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用水适量分数次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

步骤B5 含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.根据权利要求1所述的地榆炭对照提取物的制备工艺的质量控制方法，其特征在于：所述共有峰包括9个特征峰。