[发明专利]一种HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法

权利要求书

1.一种HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法，其特征在于，它包括以下步骤：(1)人血浆样品前处理；(2)液相色谱-质谱联用检测，采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为甲醇-乙腈混合溶液，在混合溶液中甲醇与乙腈的体积比为3～5:7～5；所述流动相B为2～20mM甲酸铵水溶液；(3)人血浆中奥美拉唑浓度的测定；所述梯度洗脱过程如下：在0-0.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为45:55；在0.5-2.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由45:55匀速渐变至95:5；在2.0-2.8分钟内，流动相A和流动相B的体积比为95:5；在2.8-3.2分钟内，流动相A和流动相B的体积比由95:5匀速渐变至45:55；在3.2-4.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为45:55。

2.根据权利要求1所述的HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法，其特征在于，在梯度洗脱过程中，弱洗针液为甲醇-乙腈-水混合溶液，优选地，在弱洗针液中甲醇、乙腈和水的体积比为1～3:4～2:5，更优选地，在弱洗针液中甲醇、乙腈和水的体积比为2:3:5；强洗针液为甲醇-乙腈-异丙醇混合溶液，优选地，在强洗针液中甲醇、乙腈和异丙醇的体积比为1～2:2～3:1，更优选地，在强洗针液中甲醇、乙腈和异丙醇的体积比为1:2:1。

3.根据权利要求1所述的HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法，其特征在于，所述流动相A中甲醇-乙腈的体积比为4:6；所述流动相B为10mM甲酸铵水溶液；优选地，在流动相B中，以甲酸铵水溶液的总体积为100％为基准，含有体积比为0.05～0.20％甲酸；更优选地，在流动相B中，以甲酸铵水溶液的总体积为100％为基准，含有体积比为0.1％甲酸。

4.根据权利要求1所述的HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法，其特征在于，液相色谱条件包括：色谱柱为Welch Ultimate XB-C18，优选地，该色谱柱的长度为100mm，直径为2.1mm，填料粒径为3μm；柱温为30～45℃，优选为40℃；流速为0.2～0.6mL/min，优选为0.4mL/min。

5.根据权利要求1所述的HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法，其特征在于，在步骤(1)中，人血浆样品前处理包括：人血浆样品加入内标工作液和沉淀剂，涡旋及离心后取上清液，与稀释剂混合，即得待测样品；所述内标工作液中内标为奥美拉唑-d3；所述沉淀剂为乙腈；所述稀释剂为甲醇和水的混合溶液，优选地，在所述稀释剂中甲醇和水的体积比为40～60:6～40；更优选地，在所述稀释剂中甲醇和水的体积比为50:50。

6.根据权利要求5所述的HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法，其特征在于，在步骤(1)中，内标工作溶液的配制如下：称取奥美拉唑-d3对照品，用甲醇溶解得到浓度为1.00mg/ml奥美拉唑-d3储备液，再用体积比为50:50的甲醇与水混合溶液稀释得到浓度为200ng/mL奥美拉唑-d3内标工作液。

7.根据权利要求6所述的HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法，其特征在于，在步骤(1)中，人血浆样品前处理包括：取20μL人血浆样品，加入20μL内标工作液和160μL乙腈，涡旋及离心后取50μL上清液，再与200μL稀释剂混合后，即得待测样品；所述稀释剂中甲醇和水的体积比为50:50。

8.根据权利要求6或7所述的HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法，其特征在于，所述涡旋及离心的条件为：涡旋10min，在4℃条件下以4000rpm/min速度离心10min；将待测样品置于自动进样器，进行LC-MS/MS分析，进样体积为2μL，进样器温度5℃。