[发明专利]一种用于检测牛肉掺假的检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种用于检测牛肉掺假的检测试剂盒，其特征在于：包括多条由NC膜制成的检测试纸条、与检测试纸条相同数量的胶体金冻干粉微孔、一定体积的样本提取液和样本稀释液；所述检测试纸条是包被有兔源抗牛源特异性蛋白多克隆抗体、兔源抗马源特异性蛋白多克隆抗体、兔源抗鸭源特异性蛋白多克隆抗体、山羊抗鼠源IgG多克隆抗体的试纸条；所述胶体金冻干粉微孔是胶体金颗粒标记有鼠源抗牛源特异性蛋白单克隆抗体、鼠源抗马源特异性蛋白单克隆抗体、鼠源抗鸭源特异性蛋白单克隆抗体的微孔。

2.根据权利要求1所述用于检测牛肉掺假的检测试剂盒，其特征在于:所述样本提取液包括提取液A和提取液B，所述提取液A包括有如下重量百分比的组分：PMSF 0.1-1％、丙酮5-10％、异丙醇89-94.9％；所述提取液B包括如下重量百分比的组分：EDTA 0.01-0.1％、甲醇20％、三氯乙酸0.01-0.1％；所述提取液A和提取液B的体积比为1:10。

3.根据权利要求1所述用于检测牛肉掺假的检测试剂盒，其特征在于:所述样本稀释液包括有如下如下重量百分比组分：pH值为7.1-7.4的浓度为0.1M的PBS 89.4-98.98％、甲醇1-10％、吐温-20 0.01-0.5％、防腐剂0.01-0.1％。

4.根据权利要求1所述用于检测牛肉掺假的检测试剂盒，其特征在于:所述样本稀释液和样本提取液的体积比为1:11。

5.一种用于检测牛肉掺假的检测试剂盒的制备方法，其特征在于:步骤如下：

S1，检测试纸条的制备，将纯化过后的兔源抗牛源特异性蛋白多克隆抗体、兔源抗马源特异性蛋白多克隆抗体、兔源抗鸭源特异性蛋白多克隆抗体、山羊抗鼠源IgG多克隆抗体，用缓冲液分别稀释成一定浓度的包被液，之后将包被液分别加入划膜仪加样槽中，以给定的划线宽度在NC膜上进行包被形成层析膜，包被完毕将层析膜在指定温湿度下放置多个小时；最后将层析膜、吸水纸、样品垫粘贴在底板上形成检测试纸条；

S2，胶体金冻干粉微孔的制备，在胶体金颗粒溶液中分别标记鼠源抗牛源特异性蛋白单克隆抗体、鼠源抗马源特异性蛋白单克隆抗体、鼠源抗鸭源特异性蛋白单克隆抗体，之后将标记好的胶体金颗粒溶液加入酶标板的孔中并通过冻干机中冻干，最后盖上微孔板通过微孔筒分装；

S3，制备样本提取液和样本稀释液；

S4，将相同数量的检测试纸条和胶体金冻干粉微孔，以及一定体积的样本提取液和样本稀释液包装在盒体内形成一个检测试剂盒。

6.根据权利要求5所述用于检测牛肉掺假的检测试剂盒的制备方法，其特征在于:所述缓冲液是磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液，其pH值为7.0-8.0，浓度为0.02--0.2mol/L，稀释后的兔源抗牛源特异性蛋白多克隆抗体、兔源抗马源特异性蛋白多克隆抗体、兔源抗鸭源特异性蛋白多克隆抗体、山羊抗鼠源IgG多克隆抗体包被液的浓度对应为4.8-5.2μg/ml、9.5-10.5μg/ml、6.8-7.2μg/ml、1.9-2.1μg/ml的，所述指定的温湿度是温度37±2℃、湿度30±5％，放置时间至少15小时，所述给定的划线宽度是0.5-1.0mm。

7.根据权利要求5所述用于检测牛肉掺假的检测试剂盒的制备方法，其特征在于:所述底板是表面带有粘性的PVC底板，所述层析膜粘贴在底板中部，所述吸水纸粘贴在底板的上部，所述样品垫粘贴在底板的下部，所述吸水纸和样品垫均有部分覆盖在层析膜上，所述样品垫上粘贴有箭头标。

8.根据权利要求5所述用于检测牛肉掺假的检测试剂盒的制备方法，其特征在于:所述胶体金颗粒溶液中胶体金颗粒粒径的大小是30nm--37nm，所述胶体金颗粒溶液中所标记的鼠源抗牛源特异性蛋白单克隆抗体、鼠源抗马源特异性蛋白单克隆抗体、鼠源抗鸭源特异性蛋白单克隆抗体浓度比例分别为3.3-3.7ug/ml、1.9-2.1ug/ml、7.5-8.5ug/ml。