[发明专利]一种NAMPT酶生产菌及其应用

说明书

本发明公开了一种NAMPT酶生产菌及其应用，所述NAMPT酶生产菌中含有表达NAMPT酶的重组表达载体和表达PARP1蛋白的重组表达载体。其构建方法包括以下步骤：将编码NAMPT的核苷酸片段连入质粒pLLP‑ompA，获得第一重组表达载体；将编码PARP1的核苷酸片段连入质粒pET‑42a(+)，获得第二重组表达载体；再将获得的第一重组表达载体和第二重组表达载体导入到宿主菌中，构建得到NAMPT酶生产菌。本发明将NAMPT酶的重组表达载体和PARP1蛋白的重组表达载体导入到宿主菌中，获得了NAMPT酶生产菌，通过PARP1蛋白的少量表达，显著提高了NAMPT酶的表达量和活性。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种NAMPT酶生产菌及其应用。

背景技术

尼克酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyl transferase，NAMPT)是NAD补救合成通路的限速酶，具有促血管生长、抗细胞凋亡、参与机体炎症应答、促进多种细胞分化成熟等生理功能。是防治心脑血管疾病、癌症的新靶标。

利用原核表达系统对外源基因进行表达，具有周期短、成本低、操作简便以及表达量高等优点。目前已有利用原核表达系统生产NAMPT的报道，例如：王峰以pcDNA3.1-hnampt为模板，通过PCR扩增获得两端分别为BamH I和Nde I酶切位点的hnampt片段，将该片段与pET-11a(+)表达型载体连接，获得重组表达载体，并转化至BL21star大肠杆菌，以IPTG诱导蛋白表达，以镍柱和分子筛纯化目标蛋白，制备得到重组人HAMPT蛋白(“老年小鼠脑和血清NAMPT变化及重组人的NAMPT的制备和鉴定”，浙江大学硕士毕业论文)。吕小群以BL21-CondonPlus(DE3)-RIL为宿主菌，将Nampt的pET28a+重组原核表达质粒导入到宿主菌中，经诱导表达和Ni-NTA亲和层析纯化，得到Nampt蛋白(“Nampt/Visfatin酶活性筛选模型的建立”，第二军医大学硕士学位论文)。

但通过上述原核表达系统生产NAMPT，NAMPT的表达量仍有待进一步提高。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种NAMPT酶生产菌及其应用。本发明将NAMPT酶的重组表达载体和PARP1蛋白的重组表达载体导入到宿主菌中，获得了NAMPT酶生产菌，通过PARP1蛋白的少量表达，显著提高了NAMPT酶的表达量和活性。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种NAMPT酶生产菌，所述NAMPT酶生产菌中含有表达NAMPT酶的重组表达载体和表达PARP1蛋白的重组表达载体。

本发明的第二方面，提供上述NAMPT酶生产菌的构建方法，包括以下步骤：

将编码NAMPT的核苷酸片段连入质粒pLLP-ompA，获得第一重组表达载体；将编码PARP1的核苷酸片段连入质粒pET-42a(+)，获得第二重组表达载体；再将获得的第一重组表达载体和第二重组表达载体导入到同一宿主菌中，构建得到NAMPT酶生产菌。

优选的，编码NAMPT的核苷酸片段的序列如SEQ ID NO.5所示。

优选的，编码PARP1的核苷酸片段的序列如SEQ ID NO.6所示。

优选的，所述宿主菌为大肠杆菌B21(DE3)。

本发明的第三方面，提供上述NAMPT酶生产菌在尼克酰胺磷酸核糖转移酶生产中的应用。

本发明的有益效果：