[发明专利]同时检测单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的荧光定量PCR检测引物组及试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的荧光定量PCR检测引物组，其特征在于：所述大肠杆菌为大肠杆菌O157:H7，所述引物组包括三对引物对和TaqMan探针，所述引物对和TaqMan探针的核苷酸序列如下：

hlyA-F：5’-GGGAATGGTGGAGAACGGTAA-3’；

hlyA-R：5’-CGTAGTGCCCCAGATGGAGAT-3’；

hlyA-probe：5’-FAM-ATGACCGGAACTTACC–MGB/NFQ-3’；

nuc-F：5’-CCTGAAGCAAGTGCATTTACGAAAA-3’；

nuc-R：5’-CGCTAAGCCACGTCCATATTTATCA-3’；

nuc-probe：5’-VIC-CTCGACTTCAATTTTC-MGB/NFQ-3’；

rfbE-F：5’-GGAATTAAGGAATCACCTTGCAGAT-3’；

rfbE-R：5’-ATCGTGTGGACAGGGTAAAAAACT-3’；

rfbE-probe：

5’-Texas Red-ACTCATCGAAACAAGGC-MGB/NFQ-3’。

2.根据权利要求1所述的同时检测单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的荧光定量PCR检测引物组，其特征在于：hlyA探针的5’端标记报告荧光基团FAM，淬灭基团为NFQ；nuc探针的5’端标记报告荧光基团VIC，淬灭基团为NFQ；rfbE探针的5’端标记报告荧光基团Texas Red，淬灭基团为NFQ。

3.一种同时检测单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述大肠杆菌为大肠杆菌O157:H7，所述试剂盒包括如权利要求1或2所述的引物组，所有引物对和探针均采用同一反应体系。

4.根据权利要求3所述的同时检测单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括TaqMan探针预混液，单增李斯特菌标准质粒、金黄色葡萄球菌标准质粒和大肠杆菌O157:H7标准质粒，阴性质控标准品和无菌水。

5.根据权利要求4所述的同时检测单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述TaqMan探针预混液为2×Premix Ex Taq^TM。

6.根据权利要求5所述的同时检测单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的反应体系为：2×Premix Ex Taq^TM10μL,10μmol.L^-1三种致病菌的上下游引物各0.6μL，10μmol.L^-1单增李斯特菌和大肠杆菌O157:H7探针各1.2μL，10μmol.L^-1金黄色葡萄球菌探针1.0μL，待测样品模板DNA 1μL，无菌水补足至体积20μL。

7.根据权利要求5所述的同时检测单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述荧光定量PCR的反应条件为：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火延伸45s，共40个循环；荧光信号在PCR扩增的每个循环的延伸结束时收集。