[发明专利]三种果聚糖蔗糖酶及其应用

说明书

本发明公开了三种果聚糖蔗糖酶及其应用，由保藏编号为CGMCC NO.6431的柠檬明串珠菌Leuconostoc citreum接种于番茄汁蔗糖培养基单次发酵产生。所述三种果聚糖蔗糖酶的分子量分别为130kDa、90kDa和80kDa。所述果聚糖蔗糖酶由基因组上连续排列的两个果聚糖蔗糖酶编码基因表达而成。本发明公开的三种果聚糖蔗糖酶由柠檬明串珠菌发酵而成，大大提升了果聚糖蔗糖酶的生产效率，三种果聚糖蔗糖酶均用于合成果聚糖。

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，具体涉及三种果聚糖蔗糖酶及其应用。

背景技术

Levan是一类来源于植物或微生物的果糖大分子聚合物，其分子中通常含有大量β-(2，6)果糖苷键组成的主链及少量含有大量β-(2，1)果糖苷键组成的支链。研究表明，微生物来源的Levan具有抗肿瘤、抗糖尿病、增强免疫、降血脂等功能，此外，Levan还可用于纳米材料及药物载体的制备。为了提高产物Levan的纯度，通常会将果聚糖蔗糖酶(levansucrase)从微生物中提取出来，再与底物反应来获得更高品质的Levan。然而，目前已知的产果聚糖蔗糖酶的微生物较少，并且少数微生物还有致病性，因此，寻找新型、安全的果聚糖蔗糖酶成为本领域急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供三种果聚糖蔗糖酶及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了三种果聚糖蔗糖酶，由保藏编号为CGMCC NO.6431的柠檬明串珠菌Leuconostoc citreum接种于番茄汁蔗糖培养基单次发酵产生。

进一步地，所述三种果聚糖蔗糖酶的分子量分别为130kDa、90kDa和80kDa。

进一步地，所述果聚糖蔗糖酶由基因组上连续排列的两个果聚糖蔗糖酶编码基因表达而成。

本发明还提供了三种果聚糖蔗糖酶在果聚糖制备方面的应用。

进一步地，三种果聚糖蔗糖酶均用于合成果聚糖。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本申请首次公开了三种不同分子量(130kDa、90kDa和80kDa)的果聚糖蔗糖酶，上述果聚糖蔗糖酶由保藏号为CGMCC NO.6431的柠檬明串珠菌(Leuconostoc citreum)菌株单次发酵产生，该技术大大提高了果聚糖蔗糖酶的制备效率，菌株基因组上连续排列、可正常表达且与已知同类基因低同源性(本申请的两个果聚糖蔗糖酶编码基因与已知同类基因的同源性＜30％)的果聚糖蔗糖酶编码基因表达了上述三种果聚糖蔗糖酶，上述特点使本技术方案具有显著的技术优势，因而在果聚糖制备领域具有良好的应用前景。

附图说明

图1为发酵液中果聚糖蔗糖酶的原位活性检测结果；

图2为基因1291和1292在CGMCC NO.6431基因组上的分布图；

图3为蛋白1291和1292的SDS-PAGE胶图；

图4为基因1291和1292同源性比较图；

图5为多糖样品的核磁共振图谱。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。