[发明专利]制备水凝胶支架的方法及由此得到的支架的用途

权利要求书

1.一种利用自组装多肽制备水凝胶支架的方法，其中，所述方法包括：

（1）将自组装肽序列通过共价键键合神经生长因子模拟肽，得到键合功能多肽，其中，所述自组装肽序列为RADARADARADARADA，所述神经生长因子模拟肽为GGGIDKRHWNS；

（2）分离并培养巨噬细胞，并诱导其为“替代性激活”的抗炎M2巨噬细胞，得到细胞培养上清液并进行过滤，得到经过滤的细胞培养上清液；

（3）将所述经过滤的细胞培养上清液与所述键合功能多肽混合，得到混合液并调整所述混合液的浓度，所述键合功能多肽自组装形成水凝胶支架。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述自组装肽序列与神经生长因子模拟肽通过酰胺键共价连接。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述自组装肽序列与神经生长因子模拟肽的摩尔比为（1~3）：1。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述巨噬细胞来自大鼠/小鼠腹腔或骨髓、或人外周血单个核淋巴细胞中的一种。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述的培养在30℃~40℃、3%~10%CO₂的条件下进行。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养的过程包括：将所述巨噬细胞在培养基中生长至60%~80%的汇合度后，弃去培养液并利用PBS缓冲液进行洗涤，随后向洗涤后的培养物中加入新鲜培养基并继续培养36h以上。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，向洗涤后的培养物中加入新鲜培养基并继续培养36~72h。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，向洗涤后的培养物中加入新鲜培养基并继续培养40~50h。

9.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，采用孔径为0.2~0.45μm的过滤材料对所述细胞培养上清液进行过滤。

10.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，采用10ng/ml的IL-4进行步骤（2）所述的诱导。

11.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述支架具有纳米纤维结构。

12.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述支架具有水凝胶的形态，调节后凝胶的pH为6.9~7.2，浓度为0.5wt%-4wt%。

13.权利要求1-12中任一项所述的方法制备的水凝胶支架在体外培养神经雪旺细胞中的用途，其特征在于，所述支架促进神经雪旺细胞的生长和活性。

14.权利要求1-12中任一项所述的方法制备的多水凝胶支架在制备用于组织工程再生的试剂中的用途，其特征在于，所述支架促进损伤神经的再生。