[发明专利]唐古特铁线莲中皂苷类化学对照品的分离制备工艺及其应用

权利要求书

1.唐古特铁线莲中皂苷类化学对照品的分离制备工艺，其特征在于，具体步骤包括如下：

步骤1，提取：将唐古特铁线莲全草干燥粉碎，以1g：5～30mL的比例用体积浓度为60～95％的乙醇，在提取温度为60～90℃的条件下进行加热回流提取，其中，提取次数1～4次、每次1～4h，合并提取液，减压浓缩冷冻干燥，得到粗提物；

步骤2，正丁醇粗富集：将上述粗提物混悬于纯水中，首先采用石油醚、乙酸乙酯分别萃取至上相无颜色，然后再用1～5倍体积的正丁醇萃取1～5次，收集所有正丁醇萃取液，减压浓缩，冷冻干燥，得到粗皂苷提取物；

步骤3，大孔树脂精细富集：上样，将上述粗皂苷提取物用纯水配置成7.5～60mg/mL的溶液，以1～5BV/h的流速上大孔树脂柱，流出液反复上柱1～5次，静置2～12h；除杂，采用0～40％乙醇以1～5BV/h的流速洗脱1～8BV；富集，在30～90％乙醇中，选取2～4种乙醇浓度，分别以1～5BV/h的流速洗脱1～8BV，得到2～4组洗脱馏分，分别减压浓缩至恒重，得到2～4组皂苷的精细富集粉末；

步骤4，高速逆流色谱分离：选取上述皂苷的精细富集粉末2组，分别采用高速逆流色谱分离，得到7种皂苷类化学对照品；UPLC-ELSD分析7个皂苷化学对照品的纯度均大于98％；

步骤5，结构鉴定：将所述7种皂苷类化学对照品通过¹H-NMR、¹³C-NMR进行结构鉴定，其中，6种已知皂苷分别为：Hederacholichiside F；Tanguticoside B；Tauroside St-H₁；Hederoside H₁；kalopanaxsaponin G和Hederasaponin B；1种新皂苷为3-O-β-D-allopyranosyl(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-α-L-arabinopyranosylhederagenin28-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-β-D-glucopyrano syl(1→6)-β-D-glucopyranosyl ester，对新皂苷进一步采用HMBC and NOESY确认；经结构鉴定出的7种皂苷类化学对照品为结构类似的齐墩果烷型皂苷类化合物；上述7种皂苷类化学对照品的化学结构式依次如下：

Hederacholichiside F

Tanguticoside B

Tauroside St-H₁

Hederoside H₁

kalopanaxsaponin G

Hederasaponin B

3-O-β-D-allopyranosyl(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-α-L-arabinopyranosylhederagenin28-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-β-D-glucopy ranosyl(1→6)-β-D-glucopyranosyl ester。

2.根据权利要求1所述的唐古特铁线莲中皂苷类化学对照品的分离制备工艺，其特征在于，步骤3所述的大孔树脂为HPD-100，X-5，HPD-400，AB-8，HPD-450和ADS-7中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的唐古特铁线莲中皂苷类化学对照品的分离制备工艺，其特征在于，步骤4所述高速逆流色谱分离中，采用的溶剂系统为乙酸乙酯-正丁醇-水＝1～4:1～4:1～4，v:v:v，主机转速为600～1000rpm，分离温度为25～40℃，流动相流速为1～4mL/min，采用“头-尾”或“尾-头”分离模式。

4.根据权利要求1所述的唐古特铁线莲中皂苷类化学对照品的分离制备工艺，其特征在于，步骤4所述高速逆流色谱分离步骤中，采用蒸发光散射检测器ELSD检测，其中，雾化器温度为60～90℃，载气流速为2.5L/min；采用自制分流阀系统实现分馏，所述自制分流阀系统由三通阀和处于样品收集端的微调阀组成，其中样品收集端管径为1/16～1/4英寸，样品检测端管径为100～500μm。