[发明专利]一种NK细胞体外增殖的方法及培养基

说明书

本发明涉及细胞免疫治疗领域，特别涉及一种NK细胞体外增殖的方法以及适用于该方法的培养基，尤其涉及将去铁胺作为有效成分的细胞培养基。

技术领域

本发明涉及细胞免疫治疗领域，特别涉及一种NK细胞体外增殖的方法以及适用于该方法的培养基，尤其涉及将去铁胺作为有效成分的细胞培养基。

背景技术

NK细胞(natural killer cell)属于非特异性免疫细胞，是机体重要的免疫细胞，它们无需抗原预先致敏，就可以直接杀伤某些肿瘤和病毒感染的靶细胞，因此称为自然杀伤活性细胞，其还可以分泌多种细胞因子和趋化因子参与免疫调节。因此在机体抗肿瘤和早期抗病毒或胞内寄生菌感染的免疫过程中起重要作用。NK免疫细胞治疗在抗病毒，抗肿瘤的治疗中有着广泛的应用前景。

NK免疫细胞治疗是一种输入NK免疫细胞的肿瘤免疫疗法，细胞免疫治疗对NK等免疫细胞的输入量具有较高要求，因此，需要在输入前在体外获得足够数量的NK细胞。所以，如何在体外促进NK细胞增殖并提高其对肿瘤细胞的杀伤力成为了细胞免疫治疗领域的重要研究方向。

小分子药物去铁胺(DFO)，过去半个世纪以来一直被用作铁螯合剂，六齿样结构对铁具有高亲和力，用于结合体内过多的铁，但DFO在高浓度时具有药物毒性。目前还没有报道过DFO对NK细胞增殖和杀伤活性的影响。

发明内容

本发明提出一种NK细胞体外增殖的方法以及适用于该方法的培养基，尤其涉及以去铁胺作为有效成分的细胞培养基。

本发明发现，去铁胺可以显著提升NK细胞体外增殖，还可以提升NK细胞的杀伤力，基于此，本发明提出一种使用添加了去铁胺的细胞培养基的NK细胞体外增殖的方法，以及一种添加了去铁胺的细胞培养基。

本发明的一种NK细胞体外增殖的方法的技术方案为：

一种NK细胞体外增殖的方法，其特征在于，使用添加了去铁胺的细胞培养基；

优选的，所述去铁胺的含量为小于40μM。

更优选的，所述去铁胺的含量为10μM-40μM。

另一方面，本发明提供一种NK细胞体外增殖培养基，其特征在于，所述培养基含有去铁胺。

附图说明

图1：不同DFO浓度下，NK细胞增殖率图；

图2：不同DFO浓度下，NK细胞杀伤率图；

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1

外周血NK细胞体外培养

抽取健康人外周血80mL，用100mL PBS缓冲液稀释，用淋巴细胞分离液，4℃离心15min，收集得到PBMC细胞，生理盐水洗涤，使用完全培养基(1640培养基+10％FBS)调整PBMC细胞起始密度为2×10⁶/ml，IL-2的终浓度为300U/ml，37℃、5％CO₂条件下培养。

密切注意细胞密度和生长状态，及时隔天补液或换液，使IL-2的浓度维持在300U/ml，细胞密度维持在2×10⁶/ml，培养10天。

实施例2

NK细胞培养