[发明专利]一种Au-Pd/wtE.coli纳米材料的代谢组学分析方法

权利要求书

1.一种Au-Pd/wtE. coli纳米材料的代谢组学分析方法，所述Au-Pd/wtE. coli纳米材料是以大肠杆菌作为载体与反应仓，依次以氯金酸和氯钯酸钾为前驱体，进行两步生物合成制备得到的，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

（1）对生物样品进行DESI-MSI扫描，得到水溶性代谢物和脂溶性代谢物的DESI-MSI检测结果；所述生物样品为动物模型的组织或器官的冷冻切片，所述动物模型给予了Au-Pd/wtE. coli纳米材料；

其中，DESI-MSI检测条件包括：正模式下，电压为4.5~5 kV；负模式下，电压为-4.5~-5kV；空间分辨率为50~100 µm；溶剂喷雾组成为90~95%甲醇水溶液；

（2）对所述DESI-MSI检测结果进行空间代谢组学分析。

2.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于：

所述动物模型的动物选自大鼠或小鼠；将所述Au-Pd/wtE. coli纳米材料给予动物模型的方式为尾静脉注射；所述冷冻切片的制作时间是：所述动物模型被给予Au-Pd/wtE. coli纳米材料后至少作用48小时。

3.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于：步骤（1）中，DESI-MSI检测条件包括：质荷比范围为50~1000；所述生物样品为肝组织的冰冻切片，所述空间分辨率为50~60 µm；所述生物样品为肾组织或肺组织的冰冻切片，所述空间分辨率为80~100 µm；所述溶剂喷雾中还含有重量百分比0.1~0.5%的甲酸；溶剂流速为2~4 µl/min；鞘气为N₂，压力为0.5Mbar；所述冰冻切片表面与质谱进样口的距离为2~4 mm，喷雾角度为60~70^°，喷雾口与所述冰冻切片表面的距离为5~8 mm。

4.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于：步骤（2）包括如下步骤：

（2.1）将所述DESI-MSI检测结果采用HDI软件进行分析，经过峰面积积分算法，得到处理后的水溶性和脂溶性代谢物DESI-MSI谱图；

（2.2）根据人类代谢组数据库，采用R语言算法对处理后的水溶性和脂溶性代谢物DESI-MSI谱图进行代谢物鉴定，得到空间代谢组学结果，筛选出特征代谢物。

5.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述分析方法还包括以下步骤：

（A）“Au-Pd/wtE. coli纳米材料-生物样品”共培养：将Au-Pd/wtE. coli纳米材料与生物样品共培养；

（B）代谢物提取与检测：对步骤（A）共培养后的生物样品进行代谢物提取，分别提取得到水溶性代谢物和/或脂溶性代谢物；

（C）进行液相色谱-质谱检测：分别将步骤（B）所得水溶性代谢物和/或脂溶性代谢物进行液相色谱-质谱检测，得到水溶性代谢物LC-MS/MS谱图和/或脂溶性代谢物LC-MS/MS谱图；

其中，进行水溶性代谢物检测时的色谱条件为：流动相由A相和B相组成，A相为5~10%乙腈水溶液，B相为90~95%乙腈水溶液，色谱柱填料为酰胺基亚乙基桥杂化颗粒；

进行脂溶性代谢物检测时的色谱条件为：流动相由A相和B相组成，其中，A相为60~70%乙腈水溶液，B相为90~95%异丙醇的乙腈溶液，色谱柱填料为C18硅胶颗粒。

6.按照权利要求5所述的分析方法，其特征在于：步骤（A）中，所述生物样品为人血管内皮细胞、肝细胞或者肾细胞，所述共培养的时间大于等于24小时。