[发明专利]一种山豆根的质量检测方法及其应用

权利要求书

1.一种山豆根的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1：供试品溶液的制备：取过4号筛的山豆根粉末，精密称取0.25g过40目筛的山豆根药材粉末，加入无水乙醇：氨水(3:2)0.5-1.5mL，放置30min后加入70％甲醇15-50mL加热回流30-90min，冷却，滤过，回收溶剂，残渣加入适量甲醇溶解，转移至10mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；

步骤S2：指纹图谱色谱峰指认用对照品溶液的制备：分别称取金雀花碱，对羟苄基酒石酸，麦芽酚，苦参碱，槐果碱，氧化苦参碱，氧化槐果碱，芒柄花苷，三叶豆紫檀苷，染料木素，刺芒柄花素，马卡因，山豆根酮和山豆根色烯素适量制备成混合对照品溶液，即得色谱峰指认用对照品溶液；

步骤S3：含量测定用对照品溶液的制备：分别称取金雀花碱，对羟苄基酒石酸，苦参碱，槐果碱，氧化苦参碱，氧化槐果碱，三叶豆紫檀苷，马卡因，山豆根酮和山豆根色烯素适量制备成混合对照品溶液，即得含量测定用对照品溶液；

步骤S4：高效液相色谱法测定：分别精密吸取步骤S1中的供试品溶液、步骤S2中的指纹图谱色谱峰指认用对照品溶液和步骤S3中的含量测定用对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，其色谱条件包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以pH＝2.6的10mmol/L高氯酸钾水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱，流速为0.8-1.2mL/min，柱温为25-35℃，检测波长为210-310nm，得到规定时间为80min的色谱图，然后采用外标峰面积法，同时测定山豆根中金雀花碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦参碱、氧化苦参碱、对羟苄基酒石酸、三叶豆紫檀苷，马卡因、山豆根酮、山豆根色烯素的含量，用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》对不同批次山豆根药材供试品溶液的规定时间为80min的色谱图进行处理，形成共有模式，即得山豆根的指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的山豆根的质量检测方法，其特征在于，在步骤S4中，梯度洗脱中的流动相B的比例变化为：0-15min，2％的乙腈；15-20min，2％-4％的乙腈；20-30min，4％-7％的乙腈；30-38min，7％-9％的乙腈；38-41min，9％-17％的乙腈；41-48min，17％-25％的乙腈；48-53min，25％-32％的乙腈；52-55min，32％-39％的乙腈；55-62min，39％-42％的乙腈；62-66min，42％-60％的乙腈；66-72min，60％-68％的乙腈；72-80min，68％-80％的乙腈。

3.根据权利要求1所述的山豆根的质量检测方法，其特征在于，在步骤S4中，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱的型号为Agilent ZORBHX SB-Aq-C18，规格型号为4.6*250mm，5μm；流速为1.0mL/min；柱温为32℃；检测波长为220nm。

4.根据权利要求1所述的山豆根的质量检测方法，其特征在于，在步骤S1中，加入无水乙醇：氨水(3:2)1mL，放置30min后加入70％甲醇25mL加热回流30min。

5.根据权利要求1所述的山豆根的质量检测方法，其特征在于，在步骤S2中，分别称取金雀花碱，对羟苄基酒石酸，麦芽酚，苦参碱，槐果碱，氧化苦参碱，氧化槐果碱，芒柄花苷，三叶豆紫檀苷，染料木素，刺芒柄花素，马卡因，山豆根酮和山豆根色烯素适量制备成1mg/mL的14个对照品溶液，作为母液，分别取等量对照品溶液，混匀，即得色谱峰指认用对照品溶液。

6.根据权利要求1所述的山豆根的质量检测方法，其特征在于，在步骤S3中，分别称取金雀花碱，对羟苄基酒石酸，苦参碱，槐果碱，氧化苦参碱，氧化槐果碱，三叶豆紫檀苷，马卡因，山豆根酮和山豆根色烯素适量，使用容量瓶进行配制，即得含量测定用对照品溶液，浓度依次为269.7μg/mL，3824.4μg/mL，460.1μg/mL，202.6μg/mL，1976.9μg/mL，507.2μg/mL，504μg/mL，805.9μg/mL，10323.2μg/mL，493μg/mL。