[发明专利]m6

说明书

本发明提供了m⁶A重组兔单克隆抗体及制备方法，其重链CDR1的氨基酸序列如SEQ.NO.1所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ.NO.2所示，重链CDR3的氨基酸序列如SEQ.NO.3所示；其轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ.NO.4所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ.NO.5所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ.NO.6所示。本发明提供的m⁶A重组兔单克隆抗体对m⁶A修饰的RNA有很好的富集能力，且在DNA损伤修复活体细胞模型中，检测m6A修饰的RNA有很好的灵敏度。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及m⁶A重组兔单克隆抗体及制备方法。

背景技术

N6-甲基腺嘌呤(m⁶A)是目前发现的真核生物mRNA上含量最多的化学修饰，同时也广泛存在于多种细菌和RNA病毒中。在动物或植物体内， m ⁶A可以被一系列甲基转移酶、去甲基酶和结合蛋白进行修饰、去修饰和识别。m⁶A可以通过影响RNA加工代谢从而调控多种生物学功能。相关研究还发现，RNA m6A修饰在UV诱导的DNA损伤反应中的重要作用，RNA的m⁶A修饰主要是指导细胞快速准确的将Polκ募集到损伤位点并且加速DNA的损伤修复从而促使细胞存活。因此，有关RNA的m⁶A修饰对于相关疾病机理研究、筛查以及药物研发等领域具有重要的参考因素。

目前的检测RNA的m⁶A修饰所采用的方法为m⁶A高通量检测技术与基于抗体特异性检测的技术。两者的共同点在于，为避免细胞中大量rRNA与tRNA的干扰，必须将m⁶A修饰的RNA富集出来。而采取特异性抗体富集便是常用的方法，但是，目前所用的m⁶A抗体依旧存在灵敏度不强的缺陷，难以进行IF实验；同时，在大量干扰RNA的存在下将m⁶A修饰的RNA进行富集非常困难。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了m⁶A重组兔单克隆抗体及制备方法。

具体技术方案如下：

m⁶A重组兔单克隆抗体，其不同之处在于，

其重链CDR1的氨基酸序列如SEQ.NO.1所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ.NO.2所示，重链CDR3的氨基酸序列如SEQ.NO.3所示；

其轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ.NO.4所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ.NO.5所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ.NO.6所示。

进一步，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ.NO.7所示，其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ.NO.8所示。

进一步，重链氨基酸序列如SEQ.NO.17所示，轻链氨基酸序列如SEQ.NO.18所示。

进一步，所述兔单克隆抗体的重链恒定区亚型为IgG型，所述轻链恒定区的亚型为κ型。

编码上述m6A重组兔单克隆抗体的核酸。

进一步，编码重链可变区的核酸其序列如SEQ.NO.9所示或是与之互补的序列，编码轻链可变区的核酸其序列如SEQ.NO.10所示或是与之互补的序列。

进一步，编码重链的核酸其序列如SEQ.NO.11所示或是与之互补的序列，编码轻链的核酸其序列如SEQ.NO.12所示或是与之互补的序列。

一种表达载体，其不同不处在于，包括编码权利上述m6A重组单克隆抗体的核酸。

转化或转染上述表达载体的宿主细胞。