[发明专利]一种与肝癌相关的血清tsRNA标志物、探针及其应用

说明书

本发明公开了一种与肝癌相关的血清tsRNA标志物及其应用，属于分子生物学领域。该标志物为血清中的tRF‑Gln‑TTG‑006。本发明筛选出的tsRNA对肝癌病人检测的特异性和灵敏度较高，可以大大提高肝癌诊断的准确性。该标志物可用于制备诊断试剂盒，用于肝癌的辅助早期诊断。

发明领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种与肝癌相关的血清tsRNA标志物、探针及其应用。

背景技术

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)占原发性肝癌的比例最高，到2020年，HCC在全球肿瘤相关死亡病例中占第三位，发病率居全球第六位。HCC仍然是包括中国在内的东亚地区的常见癌症之一，其发病率、患病率和活动性均显著高于其他地区。被诊断为早期的肝癌可以通过切除或者肝移植的方式治疗，相较于晚期肝癌5年生存率更高。目前CT、超声、MRI等影像学技术已被应用于HCC的早期诊断，但这些技术很难发现直径≤1cm的病灶，不足以在早期阶段检测HCC。临床仍然缺乏敏感的诊断方法或生物标志物，。

非编码小RNA是近年来肿瘤分子生物学研究领域的热点，RNA高通量测序技术的发展帮助人们发现和鉴定了多种新型非编码小RNA，其中一类被命名为 tRNA来源的小RNA(tRNA-derived small RNAs，tsRNAs)。tsRNA长约18-40nt,来源于tRNA成熟体或前体。近期研究发现tsRNA参与调节多种生理、病理功能，包括应激、翻译调控、神经系统疾病、病毒感染、表观遗传等等。研究发现，tsRNA 与肿瘤发生发展密切相关，已经有报道发现tsRNA在肺癌、慢性淋巴细胞性白血病、乳腺癌和急性髓细胞白血病中异常表达，与肿瘤的发生发展密切相关。

RNA-derived small RNAs(tsRNAs)是一类新发现的长度约为14～40个核苷酸的非编码RNA，来源于tRNA前体和成熟tRNA。最近的研究表明，tsRNAs在乳腺癌、肺癌、B细胞淋巴瘤等多种癌症中异常表达，提示tsRNAs可能参与了这些疾病的发生和发展。tsRNA同样可以稳定的存在与血清中，血清中的循环tsRNA可以作为早期乳腺癌和头颈部鳞状细胞癌等癌症的非侵入性生物标志物。然而，血清 tsRNA在肝癌无创诊断中的应用前景仍有待发掘，如果能筛选到肝癌中异常表达的血清tsRNAs作为生物标志物，并研发相应的诊断试剂盒，对肝癌的诊断现状将会有大大的推动。

发明内容

本发明的主要目的是针对肝癌临床无创诊断中的问题，提出一类与肝癌相关的血清tsRNA标志物、以及该类血清tsRNA标志物在制备肝癌诊断试剂盒中的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种与肝癌相关的血清tsRNA标志物，所述的血清tsRNA标志物为以下序列中的中的任意一种或包含该序列的组合：

tRF-Gln-TTG-006：SEQ ID No.1；

本发明提供了一种探针，所述探针能特异性捕获包括上述的与肝癌相关的血清tsRNA标志物。该探针是由Applied Biosystems公司定制合成的TaqMan tsRNA 探针。

本发明提供了上述的血清tsRNA标志物、探针在肝癌诊断试剂盒制备中的应用。

本发明提供了一种肝癌诊断试剂盒，所述试剂盒用于检测血清中的上述的 tsRNA标志物的一种或多种的表达量。

进一步的技术方案，所述的试剂盒中包括上述的探针。

进一步的技术方案，所述的试剂盒还包括PCR反应常用的试剂和酶。

进一步的技术方案，所述的试剂盒包括dNTP/AMV逆转录酶及缓冲液、MgCl2、 DEPC水和Taq酶等。

本发明的有益效果：

本发明提供的血清tsRNAs标志物作为肝癌诊断的标志物的优势在于：