[发明专利]一种EBV复合抗原、树突状细胞疫苗及其应用

说明书

本发明公开了一种EBV复合抗原、树突状细胞疫苗及其在制备EBV相关感染性疾病药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明通过在体外刺激患者自身的树突状细胞，负载具有针对EBV相关感染性疾病的超强免疫原性的多种EBV感染细胞的裂解物，并在多种细胞因子、特定激动剂情况下诱导成熟，形成完整的带有相应抗原的树突状细胞疫苗，回输到人体激活免疫系统，产生细胞毒性T细胞，杀伤EBV感染细胞，发挥免疫学效应，提高患者生存质量；且树突状细胞疫苗制作周期1周左右，时间短、成本低、安全并且几乎无副作用。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种EBV复合抗原、树突状细胞疫苗及其在制备EBV相关感染性疾病药物中的应用。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属的成员，其遗传物质为DNA，长度约为170kb，编码大约100个基因，有重要的衣壳抗原(viral capsidantigen,VCA)、早期抗原(early antigen,EA)和核心抗原(nuclear antigen,NA)的基因。该病毒人群普遍易感，在全世界广泛传播，成人的感染率高达95％，病毒可终身携带，且导致的疾病存在地域性差异。EBV的感染多发生于幼年和青春期，在感染机体后，部分发展为长期的潜伏感染，但也有可能导致人类多种恶性肿瘤和疾病的形成，如Burkitts淋巴瘤(BL)、鼻咽癌(NPC)、霍奇金淋巴瘤、非Hodgkin性淋巴瘤(NHL)、胃癌、乳腺癌和免疫功能缺陷患者发生的肿瘤等以及慢性活动性EBV感染(CAEBV)，EBV相关噬血淋巴组织细胞增生症(EBV-HLH)，传染性单核细胞增多症(IM)等。此外，EBV能专一地在体内或体外感染人及某些灵长类细胞B细胞(近年发现它亦可感染T淋巴细胞、上皮细胞及自然杀伤细胞等，并引发相关疾病)，能刺激感染细胞持续生长并引起细胞无限传代达到“永生(immortalization)”，从而形成淋巴母细胞样细胞系(lymphoblastoid cell lines，LCLs)，这类细胞系常用来研究多种疾病的发生发展，使得大规模长期研究某些疾病的发病机理成为可能。但是目前关于EBV致病机制的理解，还不完全清楚，针对EBV相关疾病尚无安全有效治疗手段。

EB病毒有复制性感染和潜伏感染2种感染方式，在复制性感染期间病毒DNA转录，表达VCA和EA，产生成熟病毒颗粒，并伴宿主细胞的溶解和死亡，这种感染方式主要见于EB病毒感染性疾病如传染性单核细胞增多症。在潜伏感染期VCA和EA的表达受到抑制，主要表达EBNA、EB病毒编码的小RNA(EBV-encoded small RNA,EBER)及潜伏膜蛋白(latentmembrane protein,LMP)，不产生新的病毒颗粒，这种感染方式主要见于EB病毒相关恶性肿瘤。EB病毒潜伏感染的病毒表达产物EB病毒潜伏感染主要表达EBER、EBNA及LMP。EB病毒潜伏感染的细胞有4种不同的基因表达类型，不同的潜伏感染类型与不同的临床恶性肿瘤性疾病有关。其中，Ⅰ型潜伏感染主要出现在地方性Burkitt淋巴瘤的肿瘤细胞中，病毒产物有EBNA-1和EBER；Ⅱ型潜伏感染涉及鼻咽癌和霍奇金病，被感染细胞中出现EBNA-1、LMP-1、LMP-2及EBER等病毒产物；Ⅲ型潜伏感染常见于免疫抑制患者的浆细胞性淋巴瘤细胞，病毒潜伏感染期的6种EBNA、3种LMP和2种EBER均可被检测到；Ⅳ型潜伏感染仅发生在健康的病毒携带者的B淋巴细胞中，这些细胞中含有EBNA-1、LMP-2及EBER-1。

传染性单核细胞增多症(IM)是EB病毒的急性感染性疾病，免疫功能正常的人初次感染EB病毒后，约50％表现为典型的传染性单核细胞增多症。其病理改变是淋巴组织的良性增生，肝、脾、心肌、肾、肾上腺、肺及中枢神经均可受累，表现为异常的淋巴细胞浸润。临床上以发热、咽峡炎、肝大、脾大、淋巴结大及外周血异型淋巴细胞增多为主要表现。该病预后一般良好，病死率为1-2％，患者多死于并发症；但极个别患者病情迁延，反复发作，转变为慢性活动性EB病毒感染。目前认为，T淋巴细胞产生抗EB病毒感染的B淋巴细胞的免疫反应是各种临床症状产生的基础。