[发明专利]一种快速检测重金属镉的免疫微球层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种快速检测重金属镉的免疫微球层析试纸条，其特征在于，它包括底板，所述底板从左向右依次设置有样品垫、免疫微球结合垫、显色区和吸水区；

所述的免疫微球结合垫设有抗Cd²⁺-ITCBE单克隆抗体与羧基微球结合形成的免疫微球探针。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测重金属镉的免疫微球层析试纸条，其特征在于，所述试纸条宽度为3-10mm。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测重金属镉的免疫微球层析试纸条，其特征在于，所述的显色区包括T线和C线；

所述T线为包被原Cd²⁺-ITCBE-CP；

所述C线为羊抗鼠抗体。

4.如权利要求1所述的一种快速检测重金属镉的免疫微球层析试纸条的制备方法，其步骤为：

1)包被原Cd²⁺-ITCBE-CP的合成：以对重金属Cd²⁺敏感的螯合剂ITCBE为中间物质，将Cd²⁺和CP连接在一起，合成高效的重金属镉完全抗原；

2)抗Cd²⁺-ITCBE-CP单克隆抗体的筛选：用所述包被原Cd²⁺-ITCBE-CP多次免疫小鼠，选择合适的小鼠进行细胞融合，筛选细胞株；采用体内诱生腹水法大规模制备单克隆抗体；

3)免疫微球探针的制备：微球活化后，加入PBS混匀，然后加入所述抗Cd²⁺-ITCBE-CP单克隆抗体，摇床孵育，再加入相应CP溶液摇床封闭；离心后弃上清，加入微球储存液复溶，2-8℃保存；

4)试纸条的组装：按从左至右的顺序将样品垫、免疫微球结合垫、显色区和吸水区依次粘贴在所述的底板上，组装成重金属镉的免疫微球层析试纸条。

5.根据权利要求4所述的一种快速检测重金属镉的免疫微球层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的对重金属Cd²⁺敏感的螯合剂为ITCBE；

所述的CP为BSA、OVA或KLH中的一种或几种；

所用的ITCBE与OVA摩尔比为10：1-30：1，ITCBE与BSA摩尔比为10：1-40：1，ITCBE与KLH摩尔比为2000：1-4000：1。

6.根据权利要求4所述的一种快速检测重金属镉的免疫微球层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的包被原Cd²⁺-ITCBE-CP的合成方式分为两种，一是ITCBE先与Cd²⁺偶联再与CP偶联，二是ITCBE先与CP偶联，再与Cd²⁺偶联。

7.根据权利要求4所述的一种快速检测重金属镉的免疫微球层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述的免疫为3-8次；

所筛选的细胞株仅分泌抗ITCBE-Cd²⁺的单克隆抗体。

8.根据权利要求4所述的一种快速检测重金属镉的免疫微球层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述微球为红色羧基微球，其粒径为100-500nm；

所选择的抗Cd²⁺-ITCBE-CP单克隆抗体为3C9、4A9、4H2或7D3中的一种或几种。

9.根据权利要求4所述的一种快速检测重金属镉的免疫微球层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所用的微球与抗Cd²⁺-ITCBE-CP单克隆抗体的比为30：1-60：1(v/w)；

所述的免疫微球探针制备条件为37℃摇床孵育2h，再加入相应CP溶液37℃摇床封闭30min。

10.根据权利要求4所述的一种快速检测重金属镉的免疫微球层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤4)中，所述的免疫微球结合垫喷涂免疫微球检测探针，所述的显色区包括T线和C线，其中：

所述T线为包被原Cd²⁺-ITCBE-CP，划线浓度为0.05-0.15mg/mL；

所述C线为羊抗鼠抗体，划线浓度为0.02-0.20mg/mL。