[发明专利]一种用于含有CpG基序重组质粒的工程菌的培养基及发酵方法

说明书

本发明公开了一种用于含有CpG基序重组质粒的工程菌的培养基。该培养基含有糖蜜4.00～8.00g/L、玉米浆8.00～10.00g/L和工业蛋白胨8.00～10.00g/L。提高CpG基序重组质粒产量的发酵方法为，使用所述的培养基培养含有CpG基序重组质粒的工程菌，发酵条件为：36.5～37.5℃培养8～9h，再38.5～42.5℃培养4～5h后，再36.5～37.5℃培养7.5～8.5h。本发明的培养基能保证CpG基序重组质粒产量，降低培养基成本，替代成本高的LB培养基。本发明的发酵方法能显著提高CpG基序重组质粒产量。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体地，涉及一种用于含有CpG基序重组质粒的工程菌的培养基及发酵方法。

背景技术

CpG-ODN是由未甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤组成的寡聚脱氧核糖核苷酸，可刺激多种免疫细胞，促进IL-12，IL-2，IFN-2等多种细胞因子的分泌，是一种强有力的免疫增强剂和疫苗佐剂，在畜牧业疾病防控中具有广阔应用前景。

Kamstrup S等报道了含有ATCGAT基序的CpG-ODN能显著刺激猪外周血单核细胞的分裂和IL-6的分泌(Kamstrup S,Verthelyi D,Klinman D M.Re sponse of porcineperipheral blood mononuclear cells to CpG-containing oligod eoxynucleotides[J].Veterinary Microbiology,2001,78(4):353-362.)，这是CpG-ODN在猪用疫苗中的首次报道。此后大量研究表明CpG-ODN是一种理想的猪用疫苗佐剂。李姣清等用CpG-ODN对仔猪进行滴鼻免疫，结果表明CpG-ODN可以显著提高新生仔猪对肠道病原菌的抵抗力(李姣清，曹婷，张玲华.CpG-O DN不同免疫途径对仔猪免疫增强效果的研究[J].广东农业科学,2012,39(6):103-105.)。CpG-ODN与抗菌肽具有协同效应，联合免疫能产生更强的免疫刺激反应。聂杰等设计合成了多条不同序列的CpG-ODN，并分别与原核表达的亚单位疫苗抗原和禽流感灭活疫苗联合接种雏鸡，结果表明这些CpG-ODN能显著增加ALV亚单位疫苗和禽流感二价灭活疫苗的抗体效价(聂杰,张丹丹,井维芳,等.不同剂量CpG-ODN佐剂与ALV-Jgp85重组蛋白联合免疫诱导种母鸡血清抗体和母源抗体的比较[J].农业生物技术学报,2014.)。Singh S M等将H9N2A IV和CpG-ODN 2007对鸡进行联合肌肉注射，结果显示红细胞凝集抑制抗体效价显著增高(Singh S M,Alkie T N,Nagy,et al.Delivery of an inactivate davian influenza virus vaccine adjuvanted with poly(D,L-lactic-co-glycolicacid)encapsulated CpG ODN induces protective immune responses in chickens[J].Vaccine,2016:4807-4813.)。张淑霞构建了一组含不同拷贝数CpG-ODN基序的真核重组质粒，并分别与疫苗联合肌肉注射仔猪，仔猪血液、口腔黏液等部位的ELISA抗体检测结果显示，重组质粒对仔猪具有显著的免疫刺激作用(Zhang S,Cai H,Cao D,et al.Recombinantplasmids containing CpG with porcine host defense peptides(PR-39/pBD-1)modulates the innate and adaptive intesti nal immune responses(includingmaternal-derived)in piglets[J].International Im munopharmacology,2019,70:467-476.)。作为目前新生仔猪大肠杆菌性腹泻主要防治手段的抗生素，因长期滥用导致了菌株的耐药性和致病力不断增强，随着近年来CpG-ODN研究的日益深入，含CpG序列的重组质粒在未来家畜疾病预防中将发挥越来越重要的作用。