[发明专利]一种提高间接标记灵敏度的方法和试剂盒

说明书

本发明提供了一种提高间接标记灵敏度的方法和试剂盒，采用双抗原夹心法检测样品中待检抗体的含量；采用本发明的方法和试剂盒，可以提高间接标记原本模式的灵敏度。

技术领域

本发明涉及蛋白检测领域。具体而言，本发明涉及提高间接标记灵敏度的方法和试剂盒。

背景技术

在申请号为200810216400.0的中国专利文献中曾提出一种“间接标记纳米颗粒的抗体检测双抗原夹心法及其试剂盒”，该专利研究了间接标记在纳米颗粒类标记物如胶体金方面的应用。纳米颗粒因为粒径较大的原因，标记物最终的形态是以纳米颗粒标记物为核心的——一个纳米颗粒标记物表面偶联多个抗原，于是间接标记带来许多优势：首先间接标记因其相当于在纳米颗粒和标记抗原之间加了一个“手臂”，所以更有利于暴露抗原表位；其次可以降低标记抗原的用量，抗原和纳米颗粒类标记物的比例理想状态是1:1。

而实际实验中，纳米颗粒类标记物经标记配体、标记抗原的振荡过程，一部分标记抗原从配体脱落游离在标记体系中导致灵敏度下降；基于此，本发明在间接标记的标记方法上做出进一步的改进，以提高灵敏度。

发明内容

在一些实施方案中，本发明可以包括下述一项或多项：

1.一种抗原标记方法，其中，所述方法包括步骤(ⅰ)配体标记纳米颗粒类标记物，(ⅱ)标记抗原标记步骤(ⅰ)所得的配体-纳米颗粒类标记物，(ⅲ)向标记体系中补充加入标记了配体的纳米颗粒类标记物，得到抗原标记复合物；其中，纳米颗粒类标记物与标记抗原之间的标记是通过抗原上的标签和标记在纳米颗粒类标记物上的可特异性识别该标签的所述配体相结合来完成的间接标记。

2.项目1所述的方法，其中，所述标记抗原包括但不限于艾滋病毒抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗原、丁型肝炎病毒抗原、戊型肝炎病毒抗原、庚型肝炎病毒抗原、风疹病毒抗原、人巨细胞病毒抗原、单纯疱疹病毒1型抗原、单纯疱疹病毒2型抗原、狂犬病毒抗原、人类T淋巴细胞白血病病毒抗原、登革热病毒抗原、人乳头瘤病毒抗原、西尼罗河病毒抗原、森林脑炎病毒抗原、麻疹病毒抗原、流感病毒抗原、副流感病毒抗原、水痘病毒抗原、艾柯病毒抗原、柯萨奇病毒抗原、乙型脑炎病毒抗原、EB病毒抗原、腮腺炎病毒抗原、梅毒螺旋体抗原、包柔氏螺旋体抗原、沙眼衣原体抗原、肺炎衣原体抗原、鹦鹉热衣原体抗原、解脲脲原体抗原、肺炎支原体抗原、结核分枝杆菌抗原、幽门螺旋杆菌抗原、淋球菌抗原、疟原虫抗原、枯氏锥虫抗原、弓形虫抗原。

3.项目1所述的方法，其中，所述纳米颗粒类标记物包括纳米颗粒、胶体、有机纳米颗粒、磁性纳米颗粒、量子点纳米颗粒、稀土络合物纳米颗粒，以及它们各自的衍生物，或者两者以上的组合物；其中所述胶体包括胶体金属、分散型染料和染料标记的微球、乳胶；其中所述胶体金属包括胶体金、胶体银、胶体硒。

4.项目1所述的方法，其中，所述标签为选择以下的多肽或蛋白：His Tag、T7 Tag、S Tag、Flag Tag、HA Tag、GST融合蛋白、Trx融合蛋白、SOD融合蛋白、CKS融合蛋白、DsbA融合蛋白、MBP融合蛋白、CBD融合蛋白，或者为生物素。

5.项目1所述的方法，其中，所述配体包括但不限于针对标签的特异性抗体、与标签有亲和力的物质如链霉亲和素或其类似物。

6.项目1所述的方法，其中，所述补充加入标记了配体的纳米颗粒类标记物的添加量可以是标记体系定容体积的5％-30％；例如可以是标记体系定容体积的7.5％-17.5％；优选为10％。

7.项目7所述的方法，其中，所述标记体系使用的标记物稀释液的组成包括20mMPB，150mM NaCl，1％BSA，0.1％Triton X-100，2％蔗糖，0.01％Proclin300。

8.项目1-7任一项所述的抗原标记复合物。

9.一种检测试剂盒，其包括项目8所述的抗原标记复合物。