[发明专利]一种联产D-塔格糖、阿拉伯糖醇和半乳糖醇的方法和应用

权利要求书

1.一种联产D-塔格糖、阿拉伯糖醇和半乳糖醇的方法，其特征在于，包括：

(1)制备同时含过表达β-gal与L-AI的重组静息细胞：

将基因重组菌E.coli BL21/β-gal-L-AI接种于Kan-Cl-LB双抗培养基中，向其中加入IPTG诱导表达，获得表达成功的E.coli BL21/β-gal-L-AI，将表达成功的E.coli BL21/β-gal-L-AI低温离心，然后用含Triton-x-100的磷酸钠缓冲液室温处理离心后的细胞，接着再次离心，收集细胞，洗涤，得到同时含过表达β-gal与L-AI的重组静息细胞；

(2)分批补料乳清粉制备D-塔格糖：

将步骤(1)中制得的重组静息细胞加入乳清粉溶液混合反应，并采取分批补料乳清粉的方式转化以制备D-塔格糖，最终得到包含D-塔格糖、D-葡萄糖和D-半乳糖的混合液；

(3)D-阿拉伯糖醇和半乳糖醇的联产：

离心包含D-塔格糖、D-葡萄糖和D-半乳糖的混合液获得上清液，然后向上清液中添加蛋白胨、硫酸铵、反丁烯二酸、磷酸二氢钾、七水硫酸镁制备发酵培养基，向培养基中接种美极梅奇酵母，震荡发酵D-葡萄糖和D-半乳糖联产D-阿拉伯糖醇和半乳糖醇，最终得到包含D-塔格糖、D-阿拉伯糖醇和半乳糖醇的发酵液。

2.根据权利要求1所述的联产D-塔格糖、阿拉伯糖醇和半乳糖醇的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述IPTG的终浓度为1mM；所述含Triton-x-100的磷酸钠缓冲液中Triton-x-100体积分数为2％。

3.根据权利要求1所述的联产D-塔格糖、阿拉伯糖醇和半乳糖醇的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乳清粉溶液中重组静息细胞干重的质量浓度为20～30g/L；

所述乳清粉溶液由100mM pH 5.5～7.0、含4～12mM MnSO₄的磷酸钠缓冲液配制，其中含100g/L-150g/L乳糖。

4.根据权利要求1所述的联产D-塔格糖、阿拉伯糖醇和半乳糖醇的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述混合反应的条件为在50～60℃、100～200rpm条件下反应。

5.根据权利要求1所述的联产D-塔格糖、阿拉伯糖醇和半乳糖醇的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述分批补料乳清粉的方式为每反应5h和12h向反应液中补充终浓度为50-60g/L乳糖的乳清粉，共补料4～6次，补料结束后继续反应至D-塔格糖浓度不增加为止。

6.根据权利要求1所述的联产D-塔格糖、阿拉伯糖醇和半乳糖醇的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述发酵培养基中各成分的终浓度如下：蛋白胨15g/L，硫酸铵2g/L，反丁烯二酸3g/L，磷酸二氢钾4g/L，七水硫酸镁2g/L；所述发酵培养基的pH为6.0～7.0。

7.根据权利要求1所述的联产D-塔格糖、阿拉伯糖醇和半乳糖醇的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述美极梅奇酵母为对数期，接种量体积分数为3％。

8.根据权利要求1所述的联产D-塔格糖、阿拉伯糖醇和半乳糖醇的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述震荡发酵的条件为在30～35℃、180～220rpm下发酵5～12天。