[发明专利]一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基，其特征在于：

所述培养基的原料按重量份包括：平衡盐水50-54份、葡萄糖10-13份、维生素4-6份、抗生素3-5份、氨基酸15-20份、Ficoll-Paque缓冲液60-80份、细胞消化液4-8份、PH调整液5-9份以及超纯水30-40份。

2.根据权利要求1所述的一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基，其特征在于：

所述平衡盐水选用Hanks液和Earle液中一种或两种的混合。

3.根据权利要求1所述的一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基，其特征在于：

所述细胞消化液选用胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、胶原酶溶液中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基，其特征在于：

所述氨基酸采用缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、组氨酸、酪氨酸、精氨酸、胱氨酸(L型)以及谷氨酰胺混合而成。

5.适用于权利要求1所述培养基的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括如下步骤：

(1)在容器中加入平衡盐水；

(2)在20℃-30℃之间的超纯水中加入干粉培养基，进一步进行搅拌，进行混合，得到混合物A；

(3)将步骤(2)中的混合物A倒入步骤(1)中的容器中，使混合物A与平衡盐水进行混合；

(4)在步骤(3)的基础上在容器中加入抗生素、细胞消化液，进行混合搅拌；

(5)进一步在容器中加入PH调整液；

(6)然后在容器中加入超纯水，进行稀释，稀释到需要的体积，通过搅拌设备进行搅拌，进行混合，得到混合物B；

(7)最后在混合物B中加入Ficoll-Paque缓冲液，不进行混合，完成培养基的制备。

6.根据权利要求5所述的一种培养基的制备方法，其特征在于：

所述步骤(2)中干粉培养基由葡萄糖、维生素以及氨基酸均匀混合而成，为干粉状。

7.根据权利要求5所述的一种培养基的制备方法，其特征在于：

所述步骤(2)中在进行干粉培养基分散到超纯水中时，需要进行水洗包装袋，进行冲洗，避免干粉痕迹在包装袋上残留。

8.根据权利要求5所述的一种培养基的制备方法，其特征在于：

所述步骤(6)中混合物B在进行制备后需要进行过滤；所述步骤(7)中混合物B加入Ficoll-Paque缓冲液后，在进行存储时，需要进行密封，同时存储环境保持无菌，存储温度为4℃。

9.根据权利要求5所述的一种培养基的制备方法，其特征在于：

所述步骤(1)至步骤(7)中在进行配比时，所有器皿均需要进行严格消毒杀菌。

10.适用于权利要求1所述培养基的应用，其特征在于：所述应用包括如下步骤：

(1)将培养基倒入到培养皿、培养试管或者培养容器中，同时使培养基温度提升至20℃-30℃；

(2)然后将需要培养的细胞倒入到培养皿、培养试管或者培养容器中，进行培养；

(3)将培养容器放置于培养箱中，进行培养，培养的过程中，通过外部的供气设备用于培养箱内部的供气，同时供气时，需要进行气源的消毒处理，避免杂菌的进入；

(4)在进行培养的同时，需要进行定时间隔加入补充培养基，提供养分；

(5)培养一定时间后，进行细胞的检测，通过将培养皿、培养试管或者培养容器中的液体倒入到离心设备中，进一步在离心设备的离心作用下，进行离心处理，使得培养细胞后的液体进行分层，使得细胞沉淀在Ficoll-Paque缓冲液之下，细菌悬浮在Ficoll-Paque缓冲液中；

(6)离心后的Ficoll-Paque缓冲液通过过滤膜进行过滤，使得细菌过滤下来，从而可进行细菌的集中，可进行快速检测细菌。