[发明专利]一种同时检测动物体液中四十八种兴奋剂的方法

说明书

本发明一种同时检测动物体液中四十八种兴奋剂的方法，先对试样用甲酸的乙腈溶液进行提取，然后用无水硫酸钠除水，再将得到的上清液吹干，通过乙腈的水溶液溶解残渣，经涡旋振荡过滤，形成待测液，利用高效液相色谱串联质谱仪测定待测液和混合标准工作液中的兴奋剂，通过得到的谱图信息进行比对，判断试样中存在相应的目标物；根据兴奋剂和对应内标物的峰面积，结合各个待测液获得过程中的提取体积、试样量、稀释倍数，采用外标法定量，求出齐帕特罗、非诺特罗、去甲乌药碱和苯丙酸诺龙的含量，采用内标法定量可求出除齐帕特罗、非诺特罗、去甲乌药碱和苯丙酸诺龙以外所有兴奋剂的含量。

技术领域

本发明涉及兴奋剂检测技术领域，具体为一种同时检测动物体液中四十八种兴奋剂的方法。

背景技术

大型体育赛事活动中，运动员尿检主要是检测尿液中蛋白同化制剂、β2-激动剂、糖皮质激素和利尿剂等兴奋剂。因为人体内新陈代谢产生的产物，主要通过肾脏的解毒后随尿液排出体外。作为运动员的营养供给，各类畜禽肉必须摄入，而监测畜禽肉是否含有兴奋剂的重要途径就是监测动物体液中兴奋剂的含量。动物体液相对于其他肌体组织，具有宰前检测、日常可监控等优点。因此检验动物体液中的兴奋剂含量，可以有效监控动物饲料、动物肌体组织中的兴奋剂含量，保护运动员的身心健康。兴奋剂种类繁多，结构差异大，并且随着时间的推移不断有新的兴奋剂涌现。

动物体液由于成分复杂，所以需要进行前处理，才能去除干扰物质，但是目前还没有相关的处理方式。另外，兴奋剂本身的检测技术也在不断发展中。为有效解决某些兴奋剂检测过程中需要衍生化、操作复杂、检测周期长、灵敏度较差等问题，目前已经采用更为先进的、灵敏度更高的气相色谱-质谱和液相色谱-质谱联用检测方法，但是关于β2-激动剂兴奋剂、蛋白同化制剂类兴奋剂、糖皮质激素兴奋剂和利尿剂类兴奋剂这48种常见兴奋剂的检测方法还没有相关报道，

因此，目前在动物体液前处理和48种常见兴奋剂的检测方面均无相关的报道，所以造成了动物体液中常见的48种兴奋剂无法同时进行检测的问题。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种同时检测动物体液中四十八种兴奋剂的方法，实现了对动物体液中48种兴奋剂同时进行检测。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种同时检测动物体液中四十八种兴奋剂的方法，所述同时检测的四十八种兴奋剂为克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、沙美特罗、非诺特罗、妥布特罗、喷布特罗、西马特罗、肾上腺素、普萘洛尔、阿替洛尔、美托洛尔、克仑丙罗、曲托喹酚、去甲乌药碱、美雄酮、司坦唑醇、甲基睾酮、丙酸睾酮、诺龙、丙酸诺龙、苯丙酸诺龙、勃地酮、群勃龙、睾酮、β-玉米赤霉醇、泽仑诺、齐帕特罗、泼尼松、泼尼松龙、地塞米松、倍他米松、氟氢可的松、甲基泼尼松龙、倍氯米松、可的松、氢化可的松、乙酰唑胺、坎利酮、氯噻酮、呋塞米、螺内酯、卞氟噻嗪、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氨苯蝶啶和4-氨基-6-氯苯-1，3二磺酰胺，包括如下步骤：

步骤1，在试样中加入与所述四十八种兴奋剂对应的同位素内标标准物质形成的混合同位素内标中间液，之后用甲酸的乙腈溶液进行提取，然后用无水硫酸钠除水，试样、甲酸的乙腈溶液和无水硫酸钠的比例为(4.88～5.12)mL：10mL：(2.5～4.5)g，从得到的提取液中分离出上清液，然后将提取液的剩余部分用相同的方式进行提取，合并得到上清液，将上清液吹干，将得到的残渣用乙腈的水溶液溶解，最后依次涡旋振荡、过滤，得到待测液；

步骤2，将待测液用高效液相色谱串联质谱仪进行测定，得到相应的谱图信息；

将由所述的四十八种兴奋剂标准物质、与所述四十八种兴奋剂对应的同位素内标标准物质和所述动物体液对应的空白基质配制的混合标准工作液，用与待测液相同的条件进行测定，得到相应的谱图信息；

步骤3，将步骤2形成的两组谱图信息进行比对，得到所述待测液和混合标准工作液中除倍他米松和地塞米松外所有兴奋剂的色谱峰峰面积，以及混合标准工作液和所述待测液中对应的内标物的峰面积；