[发明专利]高效腐解液体菌肥及其制备方法和应用

权利要求书

1.高效腐解液体菌肥，其特征在于，其内含有可分泌纤维素酶和木聚糖酶的三种高效腐解菌：寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp.WS6-1）、无色杆菌（Achromobacter sp.WS6-2）和戊糖片球菌（Pediococcuspentosaceus YC2），还包含皮壳正青霉、枯草芽孢杆菌、玫瑰黄链霉菌、哈茨木霉和嗜热毁丝霉，所述寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp.WS6-1）、无色杆菌（Achromobacter sp.WS6-2）、戊糖片球菌（Pediococcuspentosaceus YC2）、皮壳正青霉、枯草芽孢杆菌、玫瑰黄链霉菌、哈茨木霉和嗜热毁丝霉的重量份相同，且菌肥中有效活菌数≥1×10⁹cfu/mL；

所述寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp.WS6-1），该菌株于2019年12月18日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC No.20191060；

所述无色杆菌（Achromobacter sp.WS6-2），该菌株于2019年12月18日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC No.20191061；

所述戊糖片球菌（Pediococcuspentosaceus YC2），该菌株于2019年12月18日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC No.20191062。。

2.如权利要求1所述的高效腐解液体菌肥，其特征在于，所述皮壳正青霉购自北京北纳创联生物技术研究院，皮壳正青霉的资源编号为BNCC 146720。

3.根据权利要求1所述的高效腐解液体菌肥，其特征在于，所述菌肥中的枯草芽孢杆菌、玫瑰黄链霉菌、哈茨木霉、嗜热毁丝霉均购自北京北纳创联生物技术研究院，枯草芽孢杆菌的资源编号为BNCC 188080、玫瑰黄链霉菌的资源编号为BNCC 228869、哈茨木霉的资源编号为BNCC 336568、嗜热毁丝霉的资源编号为BNCC 186098。

4.一种如权利要求1-3中任一项所述的高效腐解液体菌肥的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，菌种活化

按无菌操作从斜面保种培养基上取适量纯培养物，将寡养单胞菌、无色杆菌接种至LB固体平板；接种后的平板倒置平放于培养箱26~30°C温度下培养，待细菌长出单个菌落、真菌产孢子稳定且大小均匀；

步骤2，种子培养

在无菌条件下，将步骤1活化后的寡养单胞菌、无色杆菌用接种环挑取单个菌落，分别接种于LB液体培养基；各株菌接种后26~30°C、150r/min摇床振荡培养，培养时间根据各菌的生长曲线确定，获得对数生长中后期的菌株种子液；

步骤3，扩大培养

通过步骤2获得的种子液按10~20%（V/V）接种量转接于对应类型的液体培养基中，进行扩繁，根据各株菌的生长速率调整接菌和培养时间，以便在同一时间获得浓度一致的菌液，扩大培养后的菌液依然按无菌操作，进行离心浓缩；

步骤4，混合发酵

将步骤3菌株经过离心浓缩收集的菌体/孢子，用无菌水制成浓度一致的重悬，按照1:1比例混合，将混合菌液接种到液体发酵培养基中，室温下自然发酵10d，得到性质功能稳定、有效活菌数≥1×10⁹cfu/mL的液体菌肥。

5.如权利要求4所述高效腐解液体菌肥的制备方法，其特征在于：所述步骤1，菌种活化中还包括按无菌操作从斜面保种培养基上取适量纯培养物，将枯草芽孢杆菌接种至LB固体平板；哈茨木霉、皮壳正青霉、嗜热毁丝霉接种至PDA固体平板；玫瑰黄链霉菌接种至高氏1号固体平板；戊糖片球菌接种至基础固体培养基，接种后的平板倒置平放于培养箱26~30°C温度下培养，待细菌长出单个菌落、真菌产孢子稳定且大小均匀。