[发明专利]含有嵌合抗原受体的融合蛋白及其应用

说明书

本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种含有嵌合抗原受体的融合蛋白及其应用。该融合蛋白包括依次串联的嵌合抗原受体、2A肽、第一信号肽、Sirpα结构域和IgG1 Fc；所述嵌合抗原受体包含scFv区，铰链区，跨膜域和胞内信号传导区。Sirf CAR T细胞能够减轻肿瘤负荷、提高荷瘤小鼠的生存率，并且没有明显的血液毒性和副作用，具有较好的临床应用潜力。SIRPα‑Fc融合蛋白可以增强了CAR T细胞的抗凋亡和记忆表型，并改变肿瘤组织的免疫微环境。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种含有嵌合抗原受体的融合蛋白及其应用。

背景技术

恶性肿瘤已经成为全世界最主要的死亡原因之一。随着科学技术的不断发展，通过对癌症早期的诊断和治疗，已经能够较大幅度地提高癌症的治愈率，改善患者的生活质量。但大多数恶性肿瘤仍存在预后差，易复发等问题。在所有的肿瘤治疗手段中，免疫疗法受到研究者们的不断关注和期待。免疫疗法最大的特点在于利用免疫系统自身去对抗癌症，包括抗体治疗、细胞治疗和免疫调节剂治疗。其中尤为引人关注的细胞治疗是指将细胞制剂回输到患者体内，从而激活患者自身的免疫应答以达到抗肿瘤的目的。而在细胞免疫治疗中，嵌合抗原受体（Chimerica antigen recptor，CAR）修饰T细胞（CAR-modified Tcell，CAR T）疗法被证实能够有效治疗血液系统的恶性肿瘤，成为癌症治疗领域中的热点。随着2017年美国食品药品监督管理局(FDA)正式批准了诺华公司及吉利德公司的两款CART细胞产品（Kymriah和Yescarta）上市，用于急性B淋巴细胞白血病以及弥漫性大B细胞淋巴瘤的治疗，开创了CAR T疗法的新纪元。基于CAR T在血液瘤治疗中的突破，进一步将CAR T疗法拓展到了实体瘤的治疗，并在包括乳腺癌、肝癌、结直肠癌和肺癌等多种实体肿瘤中进行了探索，但是由于实体瘤与血液瘤不同，其缺乏安全且特意的靶点，而且实体瘤存在复杂的肿瘤免疫微环境，最终导致治疗效果不佳。因此，急需发现特异且安全的实体瘤治疗靶点、优化CAR的结构、改善肿瘤微环境，从而提高CAR T细胞的抗肿瘤效应。

滋养层细胞表面抗原2（Trophoblast cell-surface antigen 2，Trop2）是由TACSTD2基因编码表达的Ⅰ型跨膜糖蛋白，是TACSTD基因家族中的一员，人TASTD2基因位于1号染色体短臂的3区2带（1p32）。Trop2在人的胚胎滋养层细胞和绒毛膜癌细胞中高表达，在正常组织和癌旁组织中不表达或低表达，在上皮细胞癌组织中高表达。相关研究表明，Trop2与肿瘤的转移与侵袭程度正相关，影响肿瘤患者的预后。靶向Trop2的单抗偶联药物（Antibody-drug conjugate，ADC）在临床治疗中具有出色的安全性和有效性，在难治性复发的三阴乳腺癌的治疗上取得令人鼓舞的结果，Trop2作为肿瘤靶向的治疗靶点受到越来越多的关注。

发明内容

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明涉及融合蛋白，其包括依次串联的嵌合抗原受体、2A肽、第一信号肽、Sirpα结构域和IgG1 Fc；

所述嵌合抗原受体包含scFv区，铰链区，跨膜域和胞内信号传导区；

所述scFv的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示；

所述Sirpα结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3所示。

根据本发明的第二方面，还涉及一种分离的核酸，其表达得到如上所述的融合蛋白。

根据本发明的第三方面，还涉及一种载体，其含有如上所述的核酸。

根据本发明的第四方面，还涉及T细胞，其含有如上所述的核酸，或被如上所述的载体所转化。

根据本发明的第五方面，还涉及组合物，其包含药学上可接受的载体以及如上所述的T细胞。