[发明专利]基因BnaCYP705a12在油菜素内酯生物合成以及生产转基因植物中的应用

权利要求书

1.基因BnaCYP705a12在油菜中的油菜素内酯生物合成中的应用，所述基因BnaCYP705a12的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.基因BnaCYP705a12编码的蛋白BnaCYP705a12在油菜中的油菜素内酯生物合成中的应用，所述蛋白质BnaCYP705a12的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种含有BnaCYP705a12基因片段的RNAi表达载体在抑制油菜中油菜素内酯生物合成中的应用，所述基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述含有BnaCYP705a12基因片段的RNAi表达载体的构建方法，包括如下步骤：

设计引物，PCR扩增BnaCYP705a12基因片段，将扩增的基因片段连接到pEasy BluntSimple载体上，转化至大肠杆菌感受态细胞，卡那霉素筛选获得阳性克隆，提取质粒，获得含BnaCYP705a12基因片段的pEasy Blunt Simple载体；将含BnaCYP705a12基因片段的pEasy Blunt Simple载体和pFGC5941载体通过酶切-连接方式重组，转化至大肠杆菌感受态细胞，经卡那霉素筛选得到成功重组的RNAi-BnaCYP705a12载体。

5.一种包含权利要求3中所述的RNAi表达载体的宿主菌在抑制油菜中油菜素内酯生物合成中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述宿主菌为农杆菌EHA105。

7.权利要求3中所述的RNAi表达载体在产生油菜素内酯生物合成缺陷的转基因油菜中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述产生油菜素内酯生物合成缺陷转基因油菜的过程，包括如下步骤：

(1)农杆菌介导的转化：将所述RNAi表达载体转化到农杆菌中，筛选阳性克隆并测序，将测序正确的阳性克隆接种到YEP液体培养基中培养至OD₆₀₀＝0.8-1.2，离心后用侵染培养基重悬至OD₆₀₀＝0.6-1.0，将油菜花苞浸没在侵染培养基中侵染后继续培养直至收获种子；

(2)转基因株系的筛选：挑选收获的种子进行种植，经过加代，定量qRT-PCR验证，最后得到纯合的油菜素内酯生物合成缺陷的转基因油菜。