[发明专利]检测槟榔缺铁的试剂盒及判断槟榔幼苗缺铁状态的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种检测槟榔缺铁的试剂盒及判断槟榔幼苗缺铁状态的方法，快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括一组基于ZIP家族的检测引物以及内参引物；所述基于ZIP家族的检测引物，包括特异性引物ZIP1和特异性引物ZIP2。本发明利用缺铁处理引起基因表达量的差异，根据差异基因在不同处理的表达量的趋势变化不同，得到检测槟榔缺铁的检测引物，对后续处理提供依据；试剂盒内的检测引物具有很高的特异性，只需提供正常的样品以及出现黄化的样品，即可通过实时荧光定量PCR技术判断槟榔幼苗是否缺铁的情况，具有特异性强、易于操作、结果可靠的特征，具有极大的潜在应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种检测槟榔缺铁的试剂盒及判断槟榔幼苗缺铁状态的方法。

背景技术

目前，铁(Fe)是植物生长所必需的微量元素，对植物的生长和代谢具有不可替代的作用。铁在光合作用、叶绿体发育、叶绿素合成、氮代谢、呼吸作用、酶氧化还原反应等各种重要过程中发挥作用。Fe²⁺和Fe³⁺的存在使其适合于氧化还原反应，并在电子转移中起着重要作用。如果过量使用，可能会有潜在的毒性。游离的Fe可通过Fenton反应产生毒性水平的氧自由基和羟基自由基。

荧光定量PCR是1996年由美国Applied Biosystems公司推出的一种新的核酸定量实验技术，它的原理是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程，通过对产物量的实时分析，最终能够对模板的初始浓度，核酸种类、基因突变类型等信息作出准确的判定。目前，荧光定量PCR在生物学研究及个体化医学基因检测领域有着广泛的应用。

ZIP是一个在植物铁转运中起重要作用的基因，响应植物缺铁，在水稻、玉米、小麦等植物中都得到验证。ZIP基因家族在缺铁的情况下可能会出现差异表达的现象。但现有技术中关于通过通过AcZIP家族基因差异性表达判断槟榔幼苗缺铁状态的方法尚未见报道。因此，亟需一种通过差异基因的表达来判断槟榔幼苗是否处于缺铁状态的方法。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术中没有详细的通过分子水平来检测槟榔缺铁的状态，大多是以生理生化手段来检验槟榔是否处于槟榔缺铁的状态，并且关于通过AcZIP家族基因差异性表达判断槟榔幼苗缺铁状态的方法尚未见报道。

解决以上问题及缺陷的难度为：需要通过多个方面来验证槟榔ZIP基因会响应槟榔的缺铁，之后通过响应的程度挑选变化程度相对显著的基因，并且可以与槟榔其他金属离子的变化趋势不一致，来区分特异响应槟榔缺铁的ZIP基因。

解决以上问题及缺陷的意义为：通过分子水平上ZIP基因的响应情况，反应了槟榔的缺铁的状态，更为准确的说明了槟榔在缺铁情况下的分子响应。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种检测槟榔缺铁的试剂盒及判断槟榔幼苗缺铁状态的方法，尤其涉及一种通过荧光定量PCR技术，利用在缺铁处理的差异表达基因，来检测槟榔差异基因表达水平的试剂盒及应用。

本发明是这样实现的，一种快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒，所述快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括一组基于ZIP家族的检测引物以及内参引物。

进一步，所述基于ZIP家族的检测引物，包括特异性引物ZIP1和特异性引物ZIP2；其中，所述特异性引物ZIP1的核苷酸序列SEQ ID NO：1所示，所述特异性引物ZIP2的核苷酸序列SEQ ID NO：2所示；所述内参引物的核苷酸序列SEQ ID NO：3所示。

本发明的另一目的在于提供一种所述快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒在检测槟榔是缺铁还是缺锌中的应用，所述快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒在检测槟榔是缺铁还是缺锌中的应用方法为：