[发明专利]斜带石斑鱼piscidin1及其合成多肽在制备抗病毒或抗细菌药物中的应用

说明书

本发明公开了斜带石斑鱼piscidin1及其合成多肽在制备抗病毒或抗细菌药物中的应用。本发明发现，斜带石斑鱼piscidin1的成熟多肽具有抗病毒及抗细菌活性，人工合成的斜带石斑鱼piscidin1的成熟多肽不仅可以抑制鱼类DNA和RNA病毒的复制，同时还能抑制鱼类病原细菌的生长，可将其应用于制备抗鱼类病毒或抗细菌的药物以及抗病功能基因制品。

技术领域

本发明属于生物技术领域。更具体地，涉及斜带石斑鱼piscidin1及其合成多肽在制备抗病毒或抗细菌药物中的应用。

背景技术

斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)为鮨科(Serranidae)鲈形目(Perciformes)石斑鱼属(Epinephelus)，是我国南方地区重要的海水养殖经济鱼类，因其富含蛋白质，营养价值高，肉质鲜嫩可口而深受广大海产消费者青睐，在水产海鲜市场的需求量较大，但细菌病和病毒病的出现给斜带石斑鱼的养殖造成重大的经济损失。其中，细菌类病原主要以弧菌属细菌(Vibrio)为主，病毒类则主要有石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouperiridovirus，SGIV)和神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus，RGNNV)。而为了防治病害，化学药剂和抗生素等的滥用使耐药性菌株日益增多，造成了药物残留、耐药性及环境污染等严重问题。为此，开展鱼类免疫抗病的基础研究及研制新型抗病基因工程产品已经成为当务之急。

抗菌肽(antimicrobial peptides，AMPs)是一类具有广谱抗微生物活性的天然小肽类物质，广泛存在于动物、植物和真菌中，具有多种生物学功能，如抗凋亡、抗病毒等，应用潜力很大。Piscidin是一类来源于鱼类的抗菌肽，为α螺旋结构，富含阳离子，具有疏水性和两亲性，广泛存在于硬骨鱼类(特别是鲈形目类)中，目前已在不同鱼类中发现Piscidin基因存在多种亚型，有些已应用于制备抗细菌及抗病毒的药物。例如中国专利CN105801680A公开了一种石斑鱼piscidin 4多肽及其应用，其实验结果表明，piscidin 4具有抑制哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)和溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)生长，以及抑制SGIV和NNV复制的活性，但piscidin 4对其它致病菌，例如创伤弧菌等的抑制效果未知，且当piscidin 4的浓度达到1600μg/mL时，其对鱼类细胞具有明显毒性，不利于其实际应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供斜带石斑鱼piscidin1及其合成多肽在制备抗病毒或抗细菌药物中的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明利用数据库中斜带石斑鱼piscidin1的基因片段设计特异性引物，从斜带石斑鱼中扩增到了编码piscidin1的基因片段，从而确定了斜带石斑鱼piscidin1的氨基酸片段。依据得到的氨基酸片段，分析其成熟肽区域，通过人工合成的方法获得了斜带石斑鱼piscidin1的成熟多肽(后称合成多肽)。结果发现人工合成的斜带石斑鱼piscidin1的成熟多肽具有抑制石斑鱼虹彩病毒和鱼类神经坏死病毒复制的活性，同时还具有抑制溶和创伤弧菌生长的活性，因此，本发明申请保护以下应用：

本发明申请保护斜带石斑鱼piscidin1在制备抗鱼类病毒或抗细菌的药物中的应用，所述斜带石斑鱼piscidin1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还申请保护编码斜带石斑鱼piscidin1的基因在制备抗鱼类病毒或抗细菌的药物中的应用，所述编码斜带石斑鱼piscidin1的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还申请保护斜带石斑鱼piscidin1的合成多肽在制备抗鱼类病毒或抗细菌的药物中的应用，所述合成多肽具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

优选地，所述鱼类病毒为石斑鱼虹彩病毒和/或鱼类神经坏死病毒，见实施例2。