[发明专利]一种粗叶榕高效组培繁育方法

权利要求书

1.一种粗叶榕高效组培繁育方法，其特征在于：包括植株预处理、外植体选择与灭菌、初代诱导培养、继代增殖培养、生根培养和炼苗移栽步骤；选择健壮、无病虫害、性状优良的粗叶榕植株作为外植体材料来源，对其进行预处理后，选择当年生幼嫩茎段作为外植体，对外植体进行灭菌修剪后，接种于初代诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于继代增殖培养基中形成丛芽，剪取单芽垂直插入生根培养基中诱导生根，最后进行炼苗移栽获得粗叶榕组培成活苗；主要操作步骤如下：

（1）植株预处理：选择健壮、无病虫害、性状优良的粗叶榕植株作为外植体材料来源，若移栽小植株是移栽盆中，若移栽植株较大不便移栽至盆中，是将其茎段进行套袋处理，将移栽植株置于大棚内或人工气候箱中养护，每5天-7天，用灭菌剂喷淋植株，待萌发出新枝条后选作外植体；

（2）外植体选择与灭菌：于晴天采集当年生幼嫩茎段，剪去叶片和叶柄，保留4 cm-6 cm长度的带芽茎段作为外植体材料；清水冲洗表面泥沙，用软毛毛刷刷洗外植体后，放入体积浓度为1%的洗洁精中震荡浸泡5 min-10 min，自来水洗掉洗涤剂，放入体积浓度为2%的新洁尔灭消毒液中浸泡30 min-60 min，流水冲洗1 h-2 h，超声波清洗机中震荡清洗10 min，放入多功能果蔬清洗机中消毒10 min，在超净工作台上，将外植体放入体积浓度为75 %的酒精溶液中浸泡10 s-30 s后，无菌水冲洗3次-5次，再放入体积浓度0.1 % HgCl₂溶液中震荡浸泡8 min-12 min，无菌水冲洗3次-5次，将外植体材料放在灭菌的滤纸上吸干水分；

（3）初代诱导培养：用剪刀将步骤（2）得到的外植体两端分别剪掉1 mm，并修剪成带1芽-2芽的茎段，垂直插入配制好的初代诱导培养基中培养，每瓶1株；

（4）继代增殖培养：待初始芽生长至3 cm-8 cm，剪掉大叶片，保留顶芽和部分叶柄，修剪成高度为1.0 cm-2.5 cm的单芽，转入配制好的继代增殖培养基中培养，每瓶6株-8株，经过20天-25天培养，增殖形成丛芽；再次进行继代增殖培养时，将丛芽底部愈伤组织切掉，切分成单芽或保留2个-3个芽的小丛接种在继代增殖培养基中培养，每瓶6株/丛-8株/丛；

（5）生根培养：将步骤（4）得到高≥1 cm的顶芽单芽垂直插入配制好生根培养基中培养，每瓶插12株-15株；

（6）炼苗移栽：待步骤（5）生根培养后的单芽根系长度≥1.0 cm时移到室外育苗棚中炼苗，5天-10天后打开培养瓶盖，开盖炼苗1天-2天后再移栽至装有育苗基质的育苗容器中，淋透水，之后进行苗木管理；

所述初代诱导培养基的配方为：MS+2-IP 0.3 mg/L +NAA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+琼脂3.7 g/L+糖30 g/L，pH=5.8-6.2；继代增殖培养基配方为：MS+2-IP 0.2 mg/L+NAA 0.1mg/L+IAA 0.5 mg/L+KT 2.0 mg/L+琼脂3.7 g/L+糖30 g/L，pH=5.8-6.2；生根培养基配方为：1/2MS+IBA 0.75 mg/L +IAA 1.0 mg/L +活性炭0.05 g/L+琼脂3.7 g/L+糖15 g/L，pH=5.8-6.2。

2.根据权利要求1所述的一种粗叶榕高效组培繁育方法，其特征在于：步骤（1）所述的移栽小植株应采用浸盆法供水，大植株套袋法使用的袋子应为透气的无纺布袋；灭菌剂为质量浓度为75 %的百菌清可湿性粉剂600-1000倍液。

3.根据权利要求1所述的一种粗叶榕高效组培繁育方法，其特征在于：步骤（2）所述的带芽茎段的直径为0.5 cm-1.0 cm；震荡浸泡时采用水平旋转震荡仪的转速为160 rpm r/min；超声波清洗时的超声功率为80 W，超声波清洗机和多功能果蔬清洗机内的用水应为灭菌水。

4.根据权利要求1所述的一种粗叶榕高效组培繁育方法，其特征在于：步骤（3）、步骤（4）、步骤（5）所述的培养的控制条件均为：温度为25±3 ℃，光照强度3000 Lx-9000 Lx，光照时间12 h/d-16 h/d。