[发明专利]纳米酶催化辅助的比率型比色检测肝素的方法

说明书

本发明属于分析化学技术领域，涉及纳米酶催化辅助的比率型比色检测肝素的方法，包括：向若干1.5mL离心管中加入900μL 0.1M的磷酸盐缓冲液，摇匀静置；分别加入50μL 1 mg/mL的FeMoO₄纳米棒水溶液、25μL 5mM TMB溶液和不同浓度的肝素溶液，保证溶液总体积为1mL；用紫外可见光谱仪获取652nm和565nm处的吸光度值，以肝素浓度为横坐标，以652nm和565nm处的吸光度比值（A₆₅₂/A₅₆₅）为纵坐标，绘制标准工作曲线；将待测样品重复操作，并与标准工作曲线对比，即得待测样品中肝素的浓度。基于待测物与纳米酶催化产生的带正电荷物种之间的特定静电相互作用，本发明所述方法实验步骤简单、快捷，可实现对肝素的超灵敏和特异性定量检测，为临床血样中肝素的测定提供可靠的结果。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，涉及肝素的检测方法，尤其涉及纳米酶催化辅助的比率型比色检测肝素的方法。

背景技术

作为一种广泛应用于临床的抗凝剂，肝素可预防在心肺手术中形成血栓。此外，它能加速多种凝血因子的失活速率，也常被用于治疗紧急的静脉血栓形成。然而，过量使用肝素会引发一系列严重的并发症，包括肝素引起的血小板减少和出血。在术后护理中肝素的指导治疗剂量为0.2-1.2U/mL，在心血管手术中为2-8U/mL。此外，肝素还参与调节一些生理和病理过程，如抗炎、抗过敏等。因此，监测临床样品中的肝素含量水平非常重要。

至今，已有多种分析和定量肝素的方法。传统上，采用活化凝血时间(ACT)、活化部分凝血酶活时间(APTT)和抗Xa试剂盒用于间接检测肝素。然而由于多种因素的干扰，这些传统方法不够精准。目前，色谱法、比色法、荧光法和电化学法已被开发用于肝素的直接高性能监测，例如：

中国专利CN201810413400.3《一种快速检测肝素和/或低分子肝素中肝素二糖含量的方法》公开了一种检测肝素的色谱法，首先将肝素与肝素酶混合反应，得到酶解产物；然后将酶解产物利用反相离子对色谱进行检测，进而获得肝素的含量信息。

中国专利CN201710413862.0《基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法》公开了一种检测肝素的荧光法，采用一锅法合成以变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇，利用分析物对铜纳米簇荧光的猝灭效应，以磷酸缓冲溶液、铜纳米簇分散体系和待测样品组成肝素检测体系，通过检测加入待测样品前后的荧光强度变化，得到待测样品中肝素的含量。

中国专利CN201710925956.6《基于碳量子点淬灭的荧光标记DNA的比例性荧光方法检测肝素钠》公开了一种基于碳量子点淬灭的荧光标记DNA比率型荧光检测肝素钠的方法，该方法利用碳量子点和FAM标记的DNA作为两种荧光来源；碳量子点会猝灭FAM标记的DNA荧光；肝素的加入可以抑制上述猝灭行为，使得碳量子点的荧光始终保持稳定，而标记的DNA荧光得以增强；据此建立比率型荧光检测肝素的方法。

中国专利CN201110302864.5《一种肝素的检测方法》公开了一种电化学检测肝素的方法，该方法利用聚合物敏感膜相中鱼精蛋白与水相中肝素的特异性结合，通过电位测定仪测定加入不同浓度肝素后的电位变化，根据初始电位变化速率，绘制标准工作曲线，对照标准工作曲线即得未知样品中肝素的浓度。

上述已公开的肝素的检测方法虽然具有一定的检测效果，但仍具有以下缺点或不足：

(1)色谱检测方法需要较昂贵的仪器设备，检测操作步骤相对复杂；

(2)大多数比色和荧光方法都是基于目标诱导的单信号变化，在实际应用中容易受到外界因素的干扰，导致检测方法的可重复性和鲁棒性不佳；

(3)大多数荧光和比色方法涉及显色底物的制备，增加了检测成本和操作难度；

(4)部分比率型检测方法涉及多种显色底物的使用，使得检测过程复杂化。

发明内容