[发明专利]化学免疫联合治疗纳米药物的制备方法及应用

说明书

本发明公开了化学免疫联合治疗纳米药物的制备方法及应用，涉及医药技术领域。本发明将TMZ和BET溴结构域抑制剂共装载的血红细胞膜伪装仿生纳米药物。仿生纳米药物作为一种多功能纳米平台，不仅可以增强血液循环时间和BBB的通透性，共递送的BET溴结构域抑制剂可通过提高TMZ敏感性降低癌细胞的增殖。BET溴结构域抑制剂可以抑制GBM肿瘤细胞DNA损伤修复，从而增强TMZ的药效。TMZ化疗和OTX均能能刺激体内免疫系统被激活，BET溴结构域抑制剂能破坏免疫抑制性PD‑L1/PD‑1轴，招募T细胞攻击肿瘤，诱导抗肿瘤免疫应激反应，达到化疗与免疫联合治疗的效果。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体而言，涉及化学免疫联合治疗纳米药物的制备方法及应用。

背景技术

替莫唑胺(TMZ)是目前治疗多形性胶质母细胞瘤(GBM)的一线化疗药物。虽然TMZ常规化疗在一定程度上能改善疗效，但由于GBM肿瘤细胞DNA自我修复机制的存在，导致GBM患者对TMZ极易产生耐药，这使得TMZ的药效大打折扣。因此，通过抑制肿瘤细胞DNA修复从而降低GBM对TMZ的耐药，对提高GBM的化疗疗效起着举足轻重的作用。

最近，利用免疫调节来治疗肿瘤引起了研究者们广泛关注。免疫疗法，如肿瘤疫苗、免疫检查点阻断疗法和CAR-T，在治疗不同类型的癌症(包括黑色素瘤、白血病和GBM)方面显示出令人鼓舞的临床结果。免疫治疗策略中，基于PD1/PD-L1免疫检查点抑制剂的阻断疗法，为癌症治疗的治疗带来了新的希望。然而，商业PD1抗体(如：纳武单抗，派姆单抗)对GBM患者的治疗效果有限，只有不到10％的患者长期有响应。主要原因归结于GBM的肿瘤微环境中免疫抑制细胞因子水平较高，T细胞浸润性较差，因此，将“冷”的免疫抑制性GBM转化为T细胞炎症性的“热”肿瘤在逆转免疫抑制及GBM免疫治疗中起着关键作用。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供化学免疫联合治疗纳米药物的制备方法及应用以解决上述技术问题。

溴结构域蛋白4(Brd4)是溴区结构域和超末端家族蛋白家族中最重要的功能蛋白。有研究发现，Brd4与DNA修复密切相关，抑制Brd4能够降低多种细胞对DNA损伤修复的反应。此外，Brd4能够降低肿瘤细胞表面PD-L1的表达。多种Brd4抑制剂(如JQ1，OTX015等)因为细胞水平上展示出良好的抗肿瘤效果，已经被用于GBM临床研究。但由于裸露的Brd4抑制剂的药代动力学短和疏水性强等原因，临床实验效果并不理想。

基于Brd4抑制剂，发明人利用纳米药物装载BET溴结构域抑制剂，抑制GBM肿瘤细胞DNA损伤修复，从而增强TMZ的药效。我们开发了一种将TMZ和BET溴结构域抑制剂共装载的血红细胞膜伪装仿生纳米药物(ABNM@TMZ/OTX)。该仿生纳米药物作为一种多功能纳米平台，不仅可以增强血液循环时间和BBB的通透性，共递送的BET溴结构域抑制剂可通过提高TMZ敏感性降低癌细胞的增殖。此外，TMZ化疗和BET溴结构域抑制剂均能刺激体内免疫系统被激活，BET溴结构域抑制剂能破坏免疫抑制性PD-L1/PD-1轴，招募T细胞攻击肿瘤，诱导抗肿瘤免疫应激反应，达到化疗与免疫联合治疗的效果。在荷原位GL261脑肿瘤的小鼠中，ABNM@TMZ/OTX的治疗显著抑制了肿瘤生长并显著延长了小鼠的存活期，且副作用小。

具体地，本发明是这样实现的：

本发明提供了一种仿生纳米药物，其包括内核和包覆于内核外的外壳，内核包括第一组分、第二组分和载体，第一组分包括替莫唑胺，第二组分包括BET溴结构域抑制剂，载体为pH敏感纳米粒子；

外壳包括红细胞膜、癌细胞膜、免疫细胞膜或血小板，生物膜上修饰有靶向剂，以使仿生纳米药物能够靶向目标细胞。