[发明专利]一种全血法鉴定鸡玫瑰冠基因型的引物、试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种全血法鉴定鸡玫瑰冠基因型的引物、试剂盒及应用，属于分子生物技术。该引物包括：Rose‑F3：CCAGCATTCCCTGTGACC；Rose‑B3：TACAAACCCGACCCCAAAGA；Rose‑FIP：ACATTCCCAGGCCACGCAGCTGCTCTGGGACGCAAAT；Rose‑BIP：ATTGCTTCAGGAAGGGGCAGGCACTCAGCAA ACAGGAACAGA。利用该引物进行PCR恒温扩增反应，通过观察扩增体系的颜色就能鉴定鸡玫瑰冠基因型。该方法操作简单、准确率高，易于推广。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，特别是涉及一种全血法鉴定鸡玫瑰冠基因型的引物、试剂盒及应用。

背景技术

鸡中最为常见的冠型为单冠，该性状主要是受遗传控制，一般在鸡品种间单冠的大小变异较丰富,而品种内较一致。突变的鸡冠性状包括玫瑰冠、豆冠、核桃冠、蔷薇冠、豌豆冠、多冠和无冠等,其中不同突变型内又分为若干表型。

玫瑰冠性状对单冠为常染色体显性遗传，且玫瑰冠性状纯合子个体精液质量差(混合输精时，纯合子个体的精液基本上无法和杂合子个体竞争)，导致生产中无法仅仅通过外观的选淘彻底将该性状提纯。

目前将玫瑰冠性状在群体中提纯的办法有两种：一是通过传统的测交手段，二是通过已有的分子手段。传统的测交手段涉及的工作步骤繁琐，周期长，过程中容易出错。目前已有的分子手段，其过程均涉及DNA抽提、PCR扩增、凝胶电泳等步骤，需要专业仪器(离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等)协助的完成，而且还需要具有一定专业水平的技术人员，才能更好的进行操作，在育种企业中一般不易实施。因此，需要一种简单易操作，且准确率高的检测手段用于玫瑰冠基因型的鉴别。

发明内容

本发明的目的是提供一种全血法鉴定鸡玫瑰冠基因型的引物、试剂盒及应用，以解决上述现有技术存在的问题，利用该引物对全血模板进行恒温扩增，通过观察扩增体系的颜色就能准确判断玫瑰冠个体基因型，该方法操作简单、准确率高，易于推广。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种全血法鉴定鸡玫瑰冠基因型的引物，包括：

Rose-F3：CCAGCATTCCCTGTGACC；

Rose-B3：TACAAACCCGACCCCAAAGA；

Rose-FIP：ACATTCCCAGGCCACGCAGCTGCTCTGGGACGCAAAT；

Rose-BIP：ATTGCTTCAGGAAGGGGCAGGCACTCAGCAAACAGGAACAGA。

本发明还提供一种全血法鉴定鸡玫瑰冠基因型的试剂盒，包含所述的引物。

本发明还提供一种全血法鉴定鸡玫瑰冠基因型的方法，包括以下步骤：

以鸡全血为模板，利用权利要求1所述的引物进行PCR扩增反应，然后再观察扩增产物的颜色进行辨别，若扩增产物为天蓝色则为单冠或玫瑰冠杂合子，若扩增产物为淡紫色则为玫瑰冠纯合子。

优选的是，扩增反应体系为：2×反应缓冲液12.5μL、Rose-F3和Rose-B3引物各1μL、Rose-FIP和Rose-BIP引物各1μL、BstDNA聚合酶1μL、羟基萘酚蓝1μL、模板2μL，去离子水补充至25μL。

优选的是，扩增条件为：将配制好的扩增反应体系放置于恒温板中，64℃反应60分钟。

本发明还提供所述的引物或者所述的试剂盒在鉴定鸡玫瑰冠基因型中的应用。

本发明公开了以下技术效果：