[发明专利]快速鉴定杨梅果实成熟期的分子标记引物组合及其应用

说明书

本发明公开了一组快速鉴定杨梅果实成熟期性状的分子标记引物组合及其应用，以期应用于杨梅果实成熟期性状分子标记辅助选择。本发明提供一组可以快速鉴定杨梅果实成熟期早晚的分子标记引物组合，为BS8.1‑25849，适用于荧光定量PCR仪等高通量分型检测平台，灵敏度高，可用于杨梅成熟期的早期快速鉴定。本发明基于开发的分子标记引物组合提供用于辅助筛选优良杨梅种质资源的方法，在杨梅果实成熟期性状表型预测上有重要的指导意义，具有操作简单、高效快速和成本低等优点。

技术领域

本发明涉及一组快速鉴定杨梅果实成熟期性状的分子标记引物组合及其应用，属于分子生物学领域。

背景技术

杨梅(Myrica rubra Sieb.and Zucc.)是原产我国南方的特色果树，果实富含花色素苷，具有较高的营养价值，鲜食与加工兼宜。根据杨梅果实成熟期性状主要可分为早、中和晚三类。然而，针对我国杨梅主产省份——浙江省而言，当前杨梅栽培品种结构过于单一，以鲜食为主，其成熟期主要集中在6月中上旬至下旬，上市周期极短，集中上市造成市场饱和与价格下降，并且果实保鲜困难，成熟期正值梅雨季节，雨水过多，造成商品果率低、优质果率更低的产业瓶颈，以及受外地杨梅的冲击等诸多问题，产业发展受到限制。因此，以市场为导向，改良品种和优化品种结构，实现成熟期提早，对提高当前杨梅生产的经济效益具有极其重要的意义。

另外，由于杨梅童期长(实生繁殖定植后8年以上)，实生苗处于幼苗阶段，其果实成熟期早晚尚未可知且无其他特征可以明示其发育后期及成年阶段的果实成熟期类型，滞后杨梅定向育种进程。有鉴于此，采用分子生物学技术理论与育种实践相结合的方法，实现杨梅单一性状的定向改造，将是未来杨梅定向育种的一条行之有效的途径。现代生物技术的发展为杨梅果实成熟期性状的早期预测鉴定提供一种有效的方法——DNA分子标记，利用与果实成熟期性状相关的特异DNA分子标记完全有可能在短时间内对杨梅育种材料的果实成熟期性状进行早期鉴定，从而可以大大加速育种的进程。因此，建立一种有效的分子标记组合及其检测方法，并实现高通量分型检测辅助筛选，成为本领域研究人员急需解决的问题之一。

本发明中的杨梅果实成熟期性状特异位点是经过杨梅当前地方主栽品种及优株群体(大于100份)DNA重测序结果，并展开全基因组关联分析(Genome wide associationstudy，GWAS)获得，经过了较大样本杨梅品种群体验证，其鉴定准确性较为可靠。

发明内容

本发明的目的是提供一组可用于快速鉴定杨梅果实成熟期性状的分子标记引物组合。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一组快速鉴定杨梅果实成熟期性状的分子标记引物组合，包括BS8.1-25849-F和BS8.1-25849-R，具体序列为：

BS8.1-25849-F：5’-GCCACCTACACCTACACCGTTAAGGGCAAAAACTA-3’，

BS8.1-25849-R：5’-GAGTCCAATATGAATGCAAGTTAACCAAG-3’。

本发明还公开了上述的分子标记引物组合在快速鉴定杨梅果实成熟期性状中的应用。

其步骤包括：

(1)引物合成：合成权利要求1所述的引物BS8.1-25849；

(2)DNA的提取：提取杨梅叶片的基因组DNA；

(3)PCR扩增：基于上述杨梅叶片基因组DNA，使用步骤(1)合成的引物BS8.1-25849-F和BS8.1-25849-R进行PCR扩增，预先加入至少一个已确定杨梅果实成熟期性状的样本DNA作为内参；

(4)扩增产物检测与分析：对PCR产物进行基因型检测分析，若有PCR扩增产物出现且与内参样本聚集为一组者即可视为同一果实成熟期性状类型，若没有任何PCR扩增产物出现者视为其他类型。