[发明专利]一种脂肽组合物及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物表面活性剂技术领域，公开了一种脂肽组合物及其制备方法和应用。往发酵完成的脂肽发酵液中加入溶菌酶搅拌反应，冷却至室温，然后加入乙醇和N‑酰基氨基酸型表面活性剂搅拌洗涤，再加入微生物絮凝剂进行絮凝沉淀，离心，取上清液喷雾干燥，得到脂肽‑N‑酰基氨基酸型表面活性剂组合物。本发明通过溶菌酶处理显著提升发酵液中脂肽含量，配合采用乙醇和N‑酰基氨基酸型表面活性剂洗涤脱附及微生物絮凝剂沉淀除杂，可以显著提高脂肽的得率和纯度。且N‑酰基氨基酸型表面活性剂原料易得，合成方法相对容易，易于生物降解，所得脂肽组合物具有生物安全性好、成本低的优势。完全符合日化洗护用品中的应用要求。

技术领域

本发明属于生物表面活性剂技术领域，具体涉及一种脂肽组合物及其制备方法和应用。

背景技术

生物表面活性剂是一种可降解的表面活性剂。生物表面活性剂不仅具有增溶、乳化、润湿、发泡、分散、降低表面张力等表面活性剂所共有的性能，与其他通过化学合成或石油炼制法生产的表面活性剂相比，还具有无毒、可生物降解、生态安全以及高表面活性等优点，在石油领域具有广阔的应用前景。生物表面活性剂作为生物表面活性剂毒性低，与人体和环境相容性好，具有良好的乳化、分散、增溶等特性。在日化用品、医药、环境保护和石油工业等领域具有良好的应用前景。

脂肽是一种主要由枯草芽孢杆菌产生的生物表面活性剂。脂肽分子中多个氨基酸组成的肽链形成亲水基，脂肪经链形成亲油基。其中，亲水的氨基酸能和经链上的羧基、羟基或氨基结合形成环状，因此，脂肽类生物表面活性剂一般是以内酯或酰胺键结合而成的环状脂肽(cyclic lipopeptide)。脂肽除了具有较强的表面活性外，还能增加憎水烃类的可生物降解性，在受烃类污染土壤和海洋的生物修复中发挥重要作用，它还能与部分重金属结合而移除受污染土壤和沉积物中的重金属，并具有一定的抗菌活性等。然而，产量低一直制约着脂肽的广泛应用。目前采用单次发酵的方法能达到的产量普遍在5～15g/L。另一方面，由于脂肽生产的特殊性，产物分离和提纯方法成本较高，因此开发简单廉价的产物分离和提纯方法十分必要。

专利CN 101838621 A公开了枯草芽孢杆菌及脂肽类生物表面活性剂的制备方法。通过将发酵液离心除去菌体，所得上清液用HCl调pH＝2.0，置4℃冰箱过夜，离心得酸沉淀产物。然而，发酵液中脂肽产物浓度较低，溶解度较大，利用酸沉淀的方式得率较低。

专利CN 102061333 A公开了一种枯草菌脂肽钠的制备方法。通过将发酵液升温至30～95℃，保温0.1～2h，以降低发酵液的粘度，改善发酵液过滤特性，然后用酸调节发酵液pH值至2～5，使未被微生物完全利用的蛋白质和所述枯草菌脂肽沉淀，枯草菌脂肽钠仍溶解于发酵液中，再用碱调发酵液pH值6～7，所述枯草菌脂肽在pH值6～7的条件下复性溶解，而未被微生物完全利用的蛋白质则无法复性，发酵液过滤时，菌体和未被微生物完全利用的蛋白质被除去。然后利用等电点沉淀法，用酸调节滤液pH值至2～5，0～8℃静置12～20h，收集沉淀，干燥即得到枯草菌脂肽钠粗提物。然而该专利技术经过多次沉淀、复溶过程，对得率影响较大。

专利CN104045686A公开了一种枯草芽孢杆菌抗菌脂肽发酵液的处理方法，包括以下步骤：1)采用离心分离方法分离枯草芽孢杆菌抗菌脂肽发酵液去除枯草芽孢杆菌菌体，收集清液；2)在清液中加入盐酸调节pH至3.0，搅拌，充分混匀后静置8小时，之后进行离心分离保留沉淀物；3)使用与初始发酵液体积相等的纯水溶解沉淀物配制成抗菌脂肽水溶液，用100kDa的聚醚砜超滤膜处理抗菌脂肽水溶液，收集深缩液；4)调节混合溶液pH至7.0，向深缩液中加入甲醇，慢速搅拌2小时；5)使用100kDa的聚醚砜超滤膜处理水溶液，收集滤清液；6)将滤清液浓缩后进行喷雾干燥，得到粉状成品抗菌脂肽。该专利技术处理步骤复杂，且现有技术往往均只利用到发酵液中的脂肽产物，对菌体内的部分产物未予利用。

发明内容

针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种脂肽组合物的制备方法。

本发明的另一目的在于提供一种通过上述方法制备得到的脂肽组合物。