[发明专利]一种基于NtPIF1基因表达水平筛选硃砂烟植株的方法有效
| 申请号： | 202110908424.8 | 申请日： | 2021-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN113584210B | 公开（公告）日： | 2023-07-04 |
| 发明（设计）人： | 宋中邦;隋学艺;张谊寒;王亚辉 | 申请（专利权）人： | 云南省烟草农业科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/29 |
| 代理公司： | 成都市鼎宏恒业知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 51248 | 代理人： | 吴锦德 |
| 地址： | 650000*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 ntpif1 基因 表达 水平 筛选 硃砂烟 植株 方法 | ||
1.基于NtPIF1基因筛选硃砂烟植株的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：单株挂牌编号、叶片取样、RNA提取及cDNA合成、基因表达水平检测、套袋自交收种;所述的步骤具体为：
步骤(1)单株挂牌编号：所有待筛烟草单株挂牌，并标记唯一编号；
步骤(2)叶片取样：取烟株幼嫩叶片组织0.1g置于液氮保存；
步骤(3)RNA提取及cDNA合成：提取叶片组织总RNA，并反转录成cDNA；
步骤(4)基因表达水平检测：根据NtPIF1基因序列设计特异qPCR引物，以叶片cDNA为模板进行qPCR分析，NtPIF1基因表达水平达到标准即为硃砂烟植株；
步骤(5)根据qPCR结果找到对应编号植株，套袋自交收种，获得稳定的硃砂烟遗传资源;所述的步骤(4)标准为：达到低于内参基因Actin的1/100，即Target/Reference＜1*10-2; NtPIF1基因序列为SEQ ID NO.1; 所述的步骤(5)获得稳定的硃砂烟遗传资源的标准为8个后代植株，叶片的NtPIF1基因表达水平低于内参基因Actin的1/100，即Target/Reference＜1*10-2；所有单株的烤后叶片均呈现显著的硃砂特征，表明筛选成功。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(4)特异qPCR引物为NtPIF1qF1：CGGAGGTGGCAGCGGTGATGC、NtPIF1qR1：ACGTTCGAAGGAGGAGGAGTC；
NtACTIN基因作为内参，为：
NtACTINq_F_1:CTGAGGTCCTTTTCCAACCA、
NtACTINq_R_1:TACCCGGGAACATGGTAGAG。
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