[发明专利]产生苄基异喹啉生物碱的微生物及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种产生BIA化合物或其前体的宿主细胞，其中：

所述宿主细胞包含一种或多种异源编码序列的多个拷贝，所述异源编码序列编码来源于与所述宿主细胞相比不同的来源生物的一种或多种酶。

2.一种产生牛心果碱的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含一种或多种异源编码序列的多个拷贝，所述异源编码序列编码来源于与所述宿主细胞相比不同的来源生物的一种或多种甲基转移酶，其中所述一种或多种甲基转移酶选自6OMT、CNMT和4’OΜΤ。

3.一种产生血根碱或血根碱前体的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含来源于与所述宿主细胞相比不同的来源生物的一种或多种酶的一种或多种异源编码序列，其中所述一种或多种酶选自BBE、CFS、CPR、STS、TNMT、MSH、P6H和DBOX，并且所述血根碱前体选自碎叶紫堇碱、刺罂粟碱、顺式-N-甲基刺罂粟碱、金黄紫堇碱、前托品和二氢血根碱。

4.一种产生原小檗碱生物碱的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含来源于与所述宿主细胞相比不同的来源生物的一种或多种酶的一种或多种异源编码序列，其中所述一种或多种酶选自BBE、S9OMT、CAS和STOX，并且所述原小檗碱生物碱由下列结构之一表示：

其中R₁-R₁₄各自独立地选自H、烷基、羟基或烷氧基。

5.一种产生蒂巴因的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含来源于与所述宿主细胞相比不同的来源生物的一种或多种酶的一种或多种异源编码序列，其中所述一种或多种酶选自SalSyn、CYP2D6、CYP2D2、SalR和SalAT。

6.一种产生阿片化合物的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含：

选自T6ODM、COR和CODM的一种或多种酶的一种或多种异源编码序列，其中所述一种或多种酶来源于与所述宿主细胞相比不同的来源生物；以及

选自恶臭假单胞菌morA和恶臭假单胞菌morB的一种或多种酶的一种或多种异源编码序列；并且所述阿片化合物选自可待因、吗啡、氢可酮、氢吗啡酮、羟考酮、二氢可待因、14-羟基可待因和二氢吗啡。

7.一种制备苄基异喹啉生物碱(BIA)的方法，其包括：

在适于蛋白质产生的条件下培养如权利要求1所述的宿主细胞；

向细胞培养物中添加起始化合物；以及

从细胞培养物中回收BIA；

其中所述宿主细胞在包含谷氨酰胺、2-酮戊二酸、谷氨酸以及2％以下的二甲基亚砜(DMSO)中的一种或多种的培养基中培养。